Anticorpo policlonale anti-SHC4 per WB, IF/ICC, ELISA - Q6S5L8

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di SHC4

• La proteina SHC-transforming 4 (SHC4), nota anche come RaLP o hShcD, è un membro della famiglia delle proteine adattatrici SHC. Contiene un dominio SH2 e un dominio di legame alla fosfotirosina, che mediano le interazioni con i recettori tirosin-chinasi attivati e gli effettori a valle.
• SHC4 attiva sia le vie migratorie dipendenti da Ras sia quelle indipendenti da Ras nei melanomi, contribuendo all'invasione e alla metastatizzazione delle cellule tumorali.
• Partecipa alle fasi iniziali della fosforilazione tirosinica indotta da agrina sulla CHRNB1 (subunità β1 del recettore dell'acetilcolina) nella membrana postsinaptica, collegando i segnali della matrice extracellulare al raggruppamento dei recettori sinaptici.
• SHC4 si localizza sulla membrana cellulare postsinaptica, coerente con il suo ruolo nella segnalazione sinaptica e nella migrazione del melanoma.
• L'espressione tissutale è altamente ristretta: SHC4 è espresso esclusivamente nei melanomi, con una debole espressione nei melanociti normali e nei nevi benigni. La sua espressione aumenta notevolmente durante la transizione dalla fase di crescita radiale a quella verticale e nei melanomi metastatici, in correlazione con l'acquisizione della capacità migratoria e invasiva.
• La proteina va incontro a splicing alternativo ed è regolata tramite fosforilazione, che modula le sue funzioni adattatrici.
• Il peso molecolare di SHC4 è di circa 69 kDa.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno, il frammento N-terminale ricombinante (aa 1-185), può rilevare diverse isoforme di SHC4 derivate da splicing alternativo. Si consiglia di utilizzare una scala di marcatori di peso molecolare a ampio intervallo per identificare le bande principali.
• Per Western blot, ci si aspetta una banda prominente vicino a 69 kDa nelle linee cellulari di melanoma; a causa dell'espressione ristretta di SHC4, validare la specificità dell'anticorpo utilizzando campioni di controllo positivo e negativo.
• Nell'immunofluorescenza o nell'ICC, prevedere una localizzazione di membrana o sinaptica; la co-colorazione con marcatori di membrana può confermare la specificità.
• La reazione crociata riportata con il topo suggerisce l'utilizzabilità in modelli murini, ma è necessario valutare l'omologia; testare nel proprio sistema di campioni per verificare la reattività.
• Gli assay ELISA possono richiedere un'attenta titolazione dell'antigene di rivestimento e della concentrazione dell'anticorpo; si consiglia di utilizzare un formato ELISA indiretto per la rilevazione.
• Per tutte le applicazioni, confermare la specificità della banda e il rapporto segnale/rumore utilizzando condizioni appropriate di blocco e lavaggio; risultati non ottimali possono richiedere la titolazione dell'anticorpo o passaggi di recupero dell'antigene.

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