Anticorpo policlonale di coniglio anti-SIGLEC3/CD33 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P20138

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di SIGLEC3/CD33

• CD33 (Siglec-3, p67, gp67) è una proteina di membrana di tipo I a singolo passaggio e un membro della famiglia delle lectine simili alle immunoglobuline leganti l'acido sialico (Siglec), caratterizzata da un dominio Ig-simile V-set N-terminale e da una coda citoplasmatica contenente due motivi inibitori basati sulla tirosina degli immunorecettori (ITIM).
• Funziona come recettore inibitorio; in seguito al legame con ligandi dell'acido sialico o con C1q, gli ITIM vengono fosforilati da chinasi simili a Src, come LCK, determinando il reclutamento delle tirosina fosfatasi PTPN6/SHP-1 e PTPN11/SHP-2, che riducono la segnalazione immunitaria (PubMed:10887109, 10556798, 10206955). Riferimenti correlati: PMID:10887109, PMID:10556798, PMID:10206955
• Si lega preferenzialmente agli acidi sialici legati in configurazione alfa-2,3 e alfa-2,6, con maggiore avidità per i glicani legati in configurazione alfa-2,6 (PubMed:7718872). Riferimenti correlati: PMID:7718872
• L'effetto repressivo di CD33 sull'attivazione dei monociti coinvolge la segnalazione della fosfoinositide 3-chinasi (PI3K) (PubMed:15597323). Riferimenti correlati: PMID:15597323
• A livello subcellulare, CD33 è localizzato sulla membrana plasmatica e nei perossisomi.
• È espresso specificamente sulle cellule della linea monocitica/mieloide, inclusi monociti, macrofagi e granulociti; nel sistema nervoso centrale si trova prevalentemente sulle cellule microgliali.
• Le parole chiave evidenziano i suoi ruoli nell'adesione cellulare, nella regolazione immunitaria e nello splicing alternativo, con modificazioni documentate di glicoproteine e fosfoproteine.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 49-259 di CD33 umano (dominio extracellulare), includendo il dominio Ig-simile V-set legante l'acido sialico. Questo design prende di mira la conformazione nativa, rendendolo adatto al rilevamento di CD33 espresso sulla superficie cellulare in applicazioni simili alla citometria a flusso (IF/ICC) e nell'immunoistochimica (IHC-P).
• Per il Western blot (WB), il peso molecolare atteso della proteina è di circa 40 kDa, ma a causa della glicosilazione la banda osservata può apparire a un peso molecolare superiore. Si consiglia di utilizzare un gel riducente e di validare il risultato con controlli positivi appropriati (ad esempio linee cellulari mieloidi come HL-60 o THP-1).
• Quando si utilizza questo anticorpo policlonale nell'immunoprecipitazione o nell'ELISA, considerare che la natura policlonale può aumentare la sensibilità, ma anche il background; si raccomanda di ottimizzare le condizioni di blocco e lavaggio.
• La reattività crociata con topo e ratto implica la presenza di epitopi conservati; tuttavia, è necessario verificare l'allineamento delle sequenze per contesti sperimentali specifici e la validazione nella specie pertinente è essenziale.
• Per la IHC-P, è necessario ottimizzare i metodi di recupero antigenico (ad esempio, tampone citrato, pH 6,0) e le condizioni di fissazione dei tessuti, poiché l'accessibilità degli epitopi può variare.
• Questo anticorpo è adatto come componente di cattura o rilevamento in un ELISA a sandwich se associato a un anticorpo compatibile; gli utenti devono verificarne le prestazioni nei propri sistemi tampone specifici.

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