Anti-SLC12A1 Coniglio Anticorpo Policlonale per WB, ELISA - Q13621

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di SLC12A1

• SLC12A1 codifica per il cotrasportatore renale specifico Na-K-2Cl (NKCC2), un membro della famiglia dei trasportatori di soluti 12, che media il simporto elettro-neutro di ioni sodio, potassio e cloruro attraverso la membrana apicale dell'ansa di Henle spessa ascendente (TAL). Riferimenti correlati: PMID:21321328
• NKCC2 è essenziale per il riassorbimento transepiteliale di NaCl nel TAL, guidando la concentrazione urinaria e la regolazione del volume; serve come bersaglio primario dei diuretici dell'ansa come la bumetanide.
• Il trasportatore può sostituire funzionalmente l'ammonio (NH4+) al potassio, facilitando la secrezione apicale di NH4+ nel TAL midollare, un processo critico per l'omeostasi renale dell'ammonio durante l'acidosi metabolica.
• L'espressione di SLC12A1 è altamente specifica per il rene, con localizzazione proteica limitata alla membrana plasmatica apicale delle cellule dei rami ascendenti spessi corticali e midollari.
• Le modifiche post-traduzionali includono la glicosilazione N-legata e la fosforilazione, che regolano il traffico e l'attività del trasportatore in risposta alla vasopressina e ad altri segnali ormonali.
• Le mutazioni in SLC12A1 causano la sindrome di Bartter tipo 1, un disturbo renale con perdita di sale caratterizzato da alcalosi ipokaliemica, ipercalciuria e poliuria, sottolineando il ruolo critico di NKCC2 nell'equilibrio elettrolitico.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico corrispondente ai residui 50–150 di SLC12A1 umano. Verificare la conservazione dell'epitopo se si utilizzano campioni non umani, sebbene sia riportata la reattività crociata con topo e ratto.
• Per il Western blotting di NKCC2 (MW prevista ~121 kDa), considerare l'uso di un gel di poliacrilammide a bassa percentuale (es. 6–8%) e tempi di trasferimento prolungati per garantire un trasferimento efficiente di questa grande proteina di membrana glicosilata.
• Includere inibitori delle fosfatasi nei buffer di lisi e considerare il trattamento con fosfatasi per risolvere gli spostamenti di banda dipendenti dalla fosforilazione, poiché NKCC2 è regolato dalla fosforilazione in risposta agli ormoni.
• Per le applicazioni ELISA, un design di saggio competitivo con il peptide immunizzante o un formato di cattura utilizzando un frammento del dominio extracellulare ricombinante potrebbe essere adatto; ottimizzare il buffer di rivestimento e le condizioni di blocco per minimizzare il legame aspecifico.

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