Anticorpo policlonale di coniglio Anti-SLCO2B1 per WB/ELISA - O94956

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di SLCO2B1

• SLCO2B1 (OATP2B1/OATP-B) è un trasportatore multispecifico di anioni organici che media l'assorbimento indipendente da Na+ di diversi substrati, inclusi coniugati solfati di steroidi (estrone-3-solfato, DHEA-S, pregnenolone solfato), prostaglandine (PGD2, PGE1, PGE2), tiroxina, leucotriene C4 e trombossano B2.
  Riferimenti correlati: PMID:10873595, PMID:11159893, PMID:11932330, PMID:12409283, PMID:12724351, PMID:28408210, PMID:16908597, PMID:25132355, PMID:14610227, PMID:19129463, PMID:29871943
• Svolge un ruolo fondamentale nella clearance epatica di anioni organici, nel trasferimento placentare di steroidi solfati derivati dal feto, nell'assorbimento intestinale di xenobiotici e nel trasporto di neurosteroidi attraverso la barriera ematoencefalica.
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• Agisce come trasportatore dell'eme, promuovendo la disponibilità cellulare di ferro attraverso l'eme ossigenasi, e media l'assorbimento della coproporfirina III, suggerendo un ruolo nell'omeostasi di eme/porfirine.
  Riferimenti correlati: PMID:35714613, PMID:26383540
• Il meccanismo di trasporto prevede lo scambio anionico, che utilizza probabilmente bicarbonato o glutammato controanioni, ed è stimolato dal pH acido; un gradiente di protoni diretto verso l'interno può guidare l'assorbimento dell'estrone-3-solfato.
  Riferimenti correlati: PMID:19129463, PMID:20507927, PMID:26277985, PMID:14610227, PMID:22201122
• Subcellulare, la proteina si localizza sulla membrana cellulare, con polarizzazione tessuto-specifica: membrana basale negli epatociti e nelle cellule di Sertoli, basolaterale nel sinciziotrofoblasto e apicale negli enterociti.
• È espresso a livelli elevati nelle membrane sinusoidali epatiche, nel rene, nei trofoblasti placentari, nell'intestino tenue, nelle cellule endoteliali della barriera ematoencefalica, nella retina, nel muscolo scheletrico e nel testicolo; è rilevato anche a livelli più bassi nel pancreas, polmone, cuore, colon, ovaia e milza.
  Riferimenti correlati: PMID:10873595, PMID:11159893, PMID:11932330, PMID:12409283, PMID:12724351, PMID:23531488, PMID:25132355, PMID:35307651
• Le modifiche post-traduzionali includono la formazione di legami disolfuro, N-glicosilazione e fosforilazione; è una glicoproteina fosforilata con più eliche transmembrana.
• Lo splicing alternativo genera più isoforme con distribuzioni tissutali distinte: l'isoforma 2 è predominante nel cervello, mentre l'isoforma 1 predomina nel fegato.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno (aa 130-210) corrisponde a una regione dell'anello intracellulare previsto, adatta per rilevare SLCO2B1 totale in condizioni denaturanti (WB) e native (ELISA); è prevista una banda a ~77 kDa, con possibili bande a peso molecolare più elevato dovute alla glicosilazione.
• Per il WB, si consiglia di utilizzare protocolli di estrazione delle proteine di membrana e di caricare controlli positivi appropriati come lisati di fegato umano, placenta o intestino; verificare la specificità in campioni di knockdown con siRNA, se disponibili.
• Nelle applicazioni ELISA, il rivestimento con proteina SLCO2B1 ricombinante o il peptide immunogeno può aiutare a valutare il titolo anticorpale; si ricorda che l'anticorpo può riconoscere SLCO2B1 di topo come indicato dalla reattività crociata, ma è necessario validarlo nel tessuto di topo specifico del vostro studio.
• Ottimizzare il blocco e la diluizione dell'anticorpo per ridurre al minimo il fondo, specialmente nei tessuti con elevata attività perossidasica endogena (es. fegato).
• Quando si studia la funzione di trasporto, ricordare che l'attività di SLCO2B1 è sensibile al pH; i saggi funzionali in vitro possono richiedere un tampone acido (pH 5–6) per imitare il microambiente.

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