Anticorpo Policlonale Anti-Smad4 per WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q13485

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di Smad4

• SMAD4 è il mediatore comune (co-SMAD) della trasduzione del segnale della superfamiglia TGF-β. Forma un complesso eterotrimerico con le SMADs regolate dal recettore (es. SMAD2/3) nel nucleo, essenziale per la regolazione trascrizionale mediata da TGF-β.
  Riferimenti correlati:
  PMID:25514493
• Agisce come coattivatore trascrizionale: SMAD4 facilita il legame al DNA del complesso SMAD2/SMAD4/FAST-1 e fornisce un dominio di attivazione per la trascrizione guidata da SMAD1 o SMAD2. Partecipa anche al complesso del fattore di trascrizione AP-1 (SMAD3/SMAD4/JUN/FOS) per sinergizzare le risposte al TGF-β.
• Funziona come soppressore tumorale; la perdita o l'inattivazione di SMAD4 è un evento frequente nell'adenocarcinoma duttale pancreatico, nel cancro colorettale e in altre neoplasie, sottolineandone il ruolo nel controllo della crescita.
• Nella fisiologia muscolare, SMAD4 agisce come interruttore nodale: quando reclutato dalla miostatina (MSTN), promuove l'atrofia attraverso la segnalazione SMAD2/4; quando rilasciato, passa all'ipertrofia mediata da BMP tramite SMAD1/5/8 (per similarità).
• SMAD4 regola positivamente l'attività chinasica di PDPK1 promuovendone la dissociazione dalla proteina inibitoria 14-3-3 YWHAQ.
• Si localizza sia nel citoplasma che nel nucleo; la traslocazione nucleare è indotta dalla stimolazione con TGF-β o BMP, dove si accumula in complessi trascrizionalmente attivi.
• Contiene il dominio MH1 N-terminale per il legame al DNA delle SBEs (5’-GTCT/AGAC-3’) e il dominio MH2 C-terminale per l'interazione con il recettore, l'oligomerizzazione e l'attivazione trascrizionale. La proteina è soggetta ad acetilazione, fosforilazione e ubiquitinazione.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde al dominio MH2 C-terminale (aa 320–552), altamente conservato tra umano, topo e ratto, in linea con la reattività incrociata riportata. Per nuove specie, si raccomanda l'allineamento delle sequenze.
• Per il Western blotting (WB), è attesa una banda a circa 60 kDa. Utilizzare appropriati controlli di caricamento e validare in lisati trattati con TGF-β rispetto a non trattati per confermare la specificità.
• Per l'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC) e l'immunoistochimica (IHC-P), si può osservare colorazione nucleare o citoplasmatica a seconda del contesto di segnalazione. Includere appropriati controlli negativi (es. linee cellulari knockout o peptide di blocco) per verificare la specificità del segnale.
• Per le applicazioni ELISA, ottimizzare l'antigene di rivestimento e le condizioni di rilevamento. L'anticorpo può essere accoppiato ad anticorpi monoclonali contro epitopi diversi per sviluppare sistemi ELISA sandwich per la quantificazione di SMAD4.
• Data la natura policlonale dell'anticorpo, la consistenza da lotto a lotto dovrebbe essere verificata in saggi quantitativi critici. Considerare l'uso della tecnologia degli anticorpi ricombinanti se la riproducibilità è una preoccupazione primaria.

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