Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Smad4 [convalidato KO] per WB, IHC-P, IP, ELISA, ChIP, CUT&Tag - Q13485

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di SMAD4

• Il membro 4 della famiglia SMAD (SMAD4), noto anche come DPC4, MADH4 e co-SMAD, è un mediatore centrale delle vie di trasduzione del segnale TGF-beta e BMP.
• Il co-SMAD comune agisce come coattivatore e mediatore della segnalazione TGF-beta. Forma un complesso eterotrimerico con SMAD2/SMAD3 nel nucleo, che è necessario per la regolazione trascrizionale mediata da TGF-beta. Riferimenti correlati: PMID:25514493
• Nella fisiologia muscolare, SMAD4 bilancia atrofia e ipertrofia: reclutato da MSTN, promuove l'atrofia tramite SMAD2/4 fosforilato; in seguito alla diminuzione di MSTN, SMAD4 passa alla via BMP per promuovere l'ipertrofia tramite SMAD1/5/8.
• Agisce in sinergia con SMAD1 e YY1 nell'espressione genica cardiaca specifica mediata da BMP, legandosi agli elementi di legame per SMAD (SBE) all'interno degli elementi di risposta BMP (BMPRE) delle regioni attivatrici cardiache.
• Componente del complesso SMAD3/SMAD4/JUN/FOS nel sito promotore AP1, necessario per l'attività trascrizionale sinergica di TGF-beta.
• Pò agire come soppressore tumorale; originariamente identificato come bersaglio di delezione nel carcinoma pancreatico 4 (DPC4), il che lo implica nella biologia del cancro.
• La localizzazione subcellulare è prevalentemente citoplasmatica, ma si trasloca nel nucleo dopo l'attivazione del recettore, in linea con il suo ruolo nella trasduzione del segnale.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Per Western blot (WB), ci si aspetta una banda di circa 60 kDa; si consiglia di utilizzare condizioni riducenti e di convalidare con lisati di controllo positivi (ad esempio HeLa, HEK293) e knockout (KO) adeguati.
• Per l'immunoistochimica (IHC-P), si raccomanda il recupero dell'antigene e la titolazione dell'anticorpo; includere controlli di isotipo e verificare la colorazione su sezioni di tessuto appropriate.
• Per l'immuno precipitazione (IP), sono adatti protocolli standard con sfere di Proteina A/G; confermare la co-immunoprecipitazione dei partner di interazione di SMAD (ad esempio SMAD2/3).
• Quando si esegue ChIP o CUT&Tag, l'epitopo (aa320-552) si trova nella regione C-terminale; assicurare l'accessibilità della cromatina e ottimizzare la concentrazione dell'anticorpo per ogni saggio.
• È possibile sviluppare una rilevazione basata su ELISA utilizzando questo anticorpo come cattura o rilevazione, ma sono necessarie titolazioni empiriche a scacchiera per determinare le concentrazioni di lavoro ottimali.

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