Anticorpo policlonale di coniglio Anti-Smad5 per WB, IHC-P, ELISA - Q99717

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di Smad5

• SMAD5 è un membro della famiglia SMAD, noto anche come JV5-1, Mothers against decapentaplegic omologo 5 (omologo MAD 5), codificato dal gene SMAD5 (MADH5).
• Dopo la stimolazione con ligando BMP, SMAD5 viene fosforilato dai recettori BMP di tipo I attivati (BMPRI) e forma un complesso con SMAD4. Questo complesso si trasloca nel nucleo e regola la trascrizione genica legandosi agli elementi di legame Smad (SBE) (PubMed:9442019, PubMed:33510867). Riferimenti correlati: PMID:9442019 PMID:33510867
• SMAD5 svolge un ruolo in diversi processi biologici tra cui lo sviluppo embrionale, la differenziazione cellulare, l'angiogenesi e l'omeostasi tissutale (PubMed:12064918, PubMed:16516194). Riferimenti correlati: PMID:12064918 PMID:16516194
• Nello stato non fosforilato, SMAD5 si localizza nel citoplasma e nei mitocondri, dove promuove la respirazione mitocondriale e la glicolisi interagendo con l'esochinasi 1 (HK1) in risposta alle variazioni del pH citoplasmatico (PubMed:28675158). Riferimenti correlati: PMID:28675158
• La localizzazione subcellulare comprende citoplasma, nucleo e mitocondrio, e riflette il suo doppio ruolo nella trasduzione del segnale e nel metabolismo energetico.
• È espresso ubiquitariamente in tutti i tessuti.
• Subisce modifiche post-traduzionali tramite fosforilazione e acetilazione, e contiene domini di legame dello zinco e di legame al DNA essenziali per la sua funzione di regolatore trascrizionale.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Per il Western blotting, aspettarsi una banda intorno a 52 kDa; utilizzare controlli di caricamento appropriati e convalidare con lisati cellulari positivi e negativi noti.
• Nell'immunohistochimica (IHC-P), il recupero dell'antigene potrebbe essere necessario a causa della localizzazione nucleare/citoplasmatica; eseguire test su sezioni di tessuto con espressione confermata di SMAD5.
• L'immunogeno copre la regione C-terminale (amminoacidi 186-465) che include il dominio MH2, quindi l'anticorpo può riconoscere sia le forme fosforilate che quelle non fosforilate; confermare gli stati di attivazione utilizzando anticorpi fosfo-specifici o trattamenti specifici.
• La reattività incrociata con topo e ratto indica epitopi conservati; quando si applica ad altre specie, verificare l'omologia della sequenza ed eseguire la convalida.
• Per ELISA, ottimizzare le condizioni di rivestimento e utilizzare SMAD5 ricombinante o lisati cellulari come controlli positivi.

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