Anticorpo policlonale Anti-SMPD1 / ASM per WB, IF/ICC, ELISA - P17405

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di SMPD1 / ASM

• SMPD1/ASM è un idrolasi lisosomiale che converte la sfingomielina in ceramide, un mediatore lipidico coinvolto nell'apoptosi, nella differenziazione e nella segnalazione cellulare. Riferimenti correlati: PMID:12563314, PMID:1840600, PMID:18815062
• Esiste in due forme enzimatiche: una mirata al compartimento endolisosomiale e l'altra rilasciata extracellularmente, con l'esocitosi lisosomiale che rappresenta una fonte principale della forma secretoria. Riferimenti correlati: PMID:20807762, PMID:21098024, PMID:9660788, PMID:12563314, PMID:20530211
• Nei lisosomi, converte la sfingomielina in ceramide e svolge un ruolo nell'esportazione del colesterolo dalle membrane endolisosomiali; possiede anche attività fosfolipasi C. Riferimenti correlati: PMID:20807762, PMID:21098024, PMID:25339683
• L'ASM secreta riorganizza i raft della membrana plasmatica generando ceramide, il che è cruciale per la difesa dell'ospite contro patogeni come Pseudomonas aeruginosa. Riferimenti correlati: PMID:12563314, PMID:17303575, PMID:20807762, PMID:9393854
• Il clivaggio operato da CASP7 nello spazio extracellulare produce una forma più attiva che aumenta la produzione di ceramide e la riparazione della membrana plasmatica durante l'infezione batterica. Riferimenti correlati: PMID:21157428
• L'attivazione dell'ASM è dirottata da virus come SARS-CoV e SARS-CoV-2 per facilitare l'infezione, e da batteri come N. gonorrhoeae.
• Difetti genetici in SMPD1 portano alla malattia di Niemann-Pick, un disturbo da accumulo lisosomiale caratterizzato dall'accumulo di sfingomielina.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre una vasta regione centrale (aa 70-340) della SMPD1 umana, suggerendo che l'anticorpo potrebbe riconoscere sia la forma precursore che quella matura. Si consiglia di utilizzare inibitori delle proteasi durante la preparazione del campione per mantenere l'integrità della proteina a lunghezza intera.
• Per il Western blot, è prevista una banda intorno a 70 kDa. Verificare la specificità utilizzando appropriati controlli positivi (es. lisati cellulari umani, di topo o di ratto noti per esprimere SMPD1) e includere controlli negativi.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, la colorazione può essere osservata nei compartimenti lisosomiali; si raccomanda la colorazione combinata con marcatori lisosomiali per confermare la localizzazione.
• L'anticorpo mostra reattività incrociata con topo e ratto; pertanto, può essere utilizzato in studi su modelli roditori, ma è sempre necessario validare nella specie e nel contesto tissutale rilevanti.
• I protocolli ELISA dovrebbero essere ottimizzati con la proteina ricombinante SMPD1 o antigeni di rivestimento appropriati; considerare l'abbinamento con anticorpi di rilevamento corrispondenti per ELISA a sandwich.

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