Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-SMPD1 (convalidato KO) per WB, IF-F, IHC-P, ELISA - P17405

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di SMPD1

• SMPD1 codifica per la sfingomielina fosfodiesterasi, nota anche come sfingomielinasi acida (aSMase). Lo splicing alternativo produce isoforme; la proteina esiste in due forme enzimatiche derivanti da traffico alternativo: una endolisosomiale, l'altra secreta. Riferimenti correlati: PMID:20807762 PMID:21098024 PMID:9660788
• Nei lisosomi, aSMase converte la sfingomielina in ceramide, svolgendo un ruolo critico nell'esportazione del colesterolo dalle membrane intraendolisosomiali ed esibendo attività fosfolipasica C. Riferimenti correlati: PMID:20807762 PMID:21098024 PMID:25339683
• Modula l'apoptosi indotta da stress attraverso la produzione di ceramide. Riferimenti correlati: PMID:8706124
• La aSMase secreta riorganizza la membrana plasmatica convertendo la sfingomielina in ceramide, e la sua secrezione è regolata positivamente da mediatori infiammatori e patogeni, facilitando la difesa dell'ospite e l'internalizzazione del patogeno. Riferimenti correlati: PMID:12563314 PMID:17303575 PMID:20807762 PMID:9393854
• Durante l'infezione batterica, la forma lisosomiale viene rilasciata extracellulare e scissa dalla CASP7, promuovendo la riparazione della membrana plasmatica e contrastando i pori perforina di GSDMD. Riferimenti correlati: PMID:21157428
• La localizzazione subcellulare include lisosomi, gocciole lipidiche e secrezione nello spazio extracellulare.
• Le modifiche post-traduzionali includono glicosilazione, fosforilazione e formazione di legami disolfuro; l'enzima è zinco-dipendente (legante metalli).

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'anticorpo è generato contro un frammento ricombinante che comprende gli amminoacidi 70–340 di SMPD1 umano, che può riconoscere epitopi all'interno del dominio catalitico. Si consiglia di convalidare la specificità utilizzando lisati cellulari knockout (KO) dove disponibili.
• Per il Western blotting (WB), utilizzare condizioni riducenti e aspettarsi una banda a circa 70 kDa. L'arricchimento lisosomiale o il trattamento con agenti stressanti possono migliorare il rilevamento.
• Nell'immunofluorescenza (IF-F) e nell'immunoistochimica (IHC-P), sono raccomandati la permeabilizzazione e il recupero dell'antigene. La co-colorazione con marcatori lisosomiali può confermare la localizzazione subcellulare.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come parte di una coppia abbinata; titolare e ottimizzare le condizioni per il proprio formato di saggio specifico.
• È riportata reattività incrociata per umano e ratto; per altre specie, si consiglia la convalida.

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