Anticorpo policlonale di coniglio anti-SMPD3 per WB ed ELISA - Q9NY59

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di SMPD3

• SMPD3 codifica la sfingomielinasi neutra 2 (nSMase2), che idrolizza la sfingomielina generando i lipidi bioattivi ceramide e fosfocolina.
• La ceramide prodotta da SMPD3 media l'apoptosi cellulare e l'arresto della crescita, e l'enzima può regolare indipendentemente questi due processi.
• SMPD3 svolge la funzione di soppressore della crescita nelle cellule confluenti, regolando così il ciclo cellulare.
• SMPD3 svolge un ruolo critico nello sviluppo postnatale, contribuendo alla mineralizzazione delle ossa e della dentina. Riferimenti correlati: PMID:10823942 PMID:14741383 PMID:15051724
• SMPD3 idrolizza inoltre la sfingosilfosfocolina e si lega a fosfolipidi anionici quali la fosfatidilserina e l'acido fosfatidico, che ne modulano l'attività e la localizzazione subcellulare.
• A livello subcellulare, SMPD3 si localizza nella membrana dell'apparato di Golgi e nella membrana cellulare.
• SMPD3 è soggetto a splicing alternativo, che produce molteplici varianti trascrizionali.
• Espresso prevalentemente nel cervello, SMPD3 potrebbe essere coinvolto nell'attivazione di JNK indotta da IL-1β negli epatociti e nella regolazione di NOS2/iNOS mediata da NF-κB in condizioni infiammatorie (per similitudine).

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre la regione C-terminale (aa 416-655), che può conferire specificità per l'isoforma; convalidare la specificità dell'anticorpo utilizzando il blocco con peptide o controlli di knockdown per il sistema target.
• Per il Western blot, la banda attesa è a circa 71 kDa. Ottimizzare il caricamento delle proteine e le condizioni di blocco e utilizzare lisati di tessuto cerebrale umano, murino o di ratto come controlli positivi, considerata l'elevata espressione nel cervello.
• Nelle applicazioni ELISA, eseguire diluizioni seriali dell'anticorpo per determinare la concentrazione di lavoro ottimale; includere la proteina SMPD3 ricombinante come controllo positivo.
• La palmitoilazione di SMPD3 (come indicato da UniProt) può influenzare la migrazione o il legame dell'anticorpo; durante la preparazione dei campioni devono essere mantenute condizioni denaturanti e riducenti.
• È riportata reattività crociata con topo e ratto; tuttavia, verificare i pattern di colorazione utilizzando modelli knockout o di sovraespressione per garantire la specificità.

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