Anticorpo policlonale anti-SPHK1 per IHC-P, ELISA - Q9NYA1

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di SPHK1

• SPHK1, nota anche come SPHK, è una chinasi della sfingosina che catalizza la fosforilazione della sfingosina per formare sfingosina-1-fosfato (S1P), un mediatore lipidico chiave con funzioni intra- ed extracellulari (PubMed:11923095, PubMed:20577214, PubMed:23602659). Riferimenti correlati: PMID:11923095, PMID:20577214, PMID:23602659
• A differenza della SPHK2 pro-apoptotica, SPHK1 promuove la crescita cellulare e inibisce l'apoptosi; partecipa inoltre al traffico di membrana endocitico e alla maturazione degli endosomi indipendentemente dalla sua attività chinasica (PubMed:16118219, PubMed:24929359, PubMed:28049734). Riferimenti correlati: PMID:16118219, PMID:24929359, PMID:28049734
• Attraverso S1P, SPHK1 stimola l'attività della ligasi E3 dell'ubiquitina TRAF2 e promuove l'attivazione di NF-kappa-B in risposta alla segnalazione del TNF, portando alla secrezione di IL-17; inoltre regola negativamente l'induzione di RANTES attraverso la via MAPK p38 (PubMed:20577214, PubMed:23935096). Riferimenti correlati: PMID:20577214, PMID:23935096
• Inoltre, SPHK1 possiede attività acetiltransferasica della serina su PTGS2/COX2, potenziata dalla sfingosina, e promuove la secrezione neuronale di mediatori specializzati pro-risolutivi durante la neuroinfiammazione.
• A livello subcellulare, SPHK1 si localizza nel citoplasma, nel nucleo, nella membrana cellulare, nella membrana degli endosomi, nelle fossette rivestite di clatrina e nelle sinapsi.
• SPHK1 è ampiamente espressa, con i livelli più elevati nel fegato adulto, nei reni, nel cuore e nel muscolo scheletrico; è inoltre rilevabile a livello proteico nella corteccia cerebrale.
• Le parole chiave ne evidenziano i ruoli nel metabolismo lipidico, nel legame alla calmodulina, nella fosforilazione e nello splicing alternativo.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno utilizzato è un peptide sintetico che comprende gli amminoacidi 201-300 di SPHK1 umano (NP_001136074.1). Gli anticorpi policlonali generati contro questa regione possono riconoscere più isoforme o forme modificate post-traduzionalmente; i ricercatori devono verificarne la specificità nel proprio contesto sperimentale.
• Per l'IHC-P, si consiglia di utilizzare tessuti con elevata espressione di SPHK1, come fegato o rene, come controlli positivi e di ottimizzare empiricamente il recupero antigenico e la diluizione dell'anticorpo.
• Nell'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato per rilevare SPHK1 in lisati cellulari o preparazioni di proteina ricombinante; è necessario determinare condizioni appropriate di bloccaggio e lavaggio.
• È stata segnalata reattività crociata con topo e ratto, ma è necessario verificare l'omologia di sequenza della regione immunogena in queste specie per confermare il riconoscimento previsto.
• In quanto anticorpo policlonale, può essere adatto alla rilevazione di SPHK1 denaturata o nativa, ma le condizioni di Western blot denaturante potrebbero non essere ottimali considerando i limiti dell'applicazione; per eventuali altre applicazioni è necessaria una validazione.

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