Anticorpo monoclonale anti-glicoproteina Spike per WB, IF/ICC, ELISA - P0DTC2

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della glicoproteina Spike

• La glicoproteina Spike (S) è una proteina di fusione virale di classe I responsabile della mediazione dell'ingresso di SARS-CoV-2 nelle cellule ospiti.
• La proteina S si attacca alla cellula ospite interagendo con il recettore dell'enzima di conversione dell'angiotensina 2 (ACE2), avviando l'infezione (PubMed:32142651, PubMed:32155444, PubMed:33607086). Riferimenti correlati: PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086
• Il clivaggio proteolitico nel sito S2/S2' da parte delle proteasi ospiti TMPRSS2 o catepsina L innesca cambiamenti conformazionali irreversibili, portando alla fusione delle membrane virali e cellulari (PubMed:32142651, PubMed:32703818, PubMed:34159616, PubMed:34561887). Riferimenti correlati: PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• I recettori alternativi di ingresso nell'ospite includono la neuropilina-1/2 (NRP1/NRP2) e il recettore 1 delle asialoglicoproteine (ASGR1), che potrebbero spiegare il tropismo per le cellule dell'epitelio olfattivo e le vie indipendenti dall'ACE2 (PubMed:33082294, PubMed:33082293, PubMed:34837059). Riferimenti correlati: PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:34837059
• La proteina contiene regioni a bobina avvolta (coiled coil), legami disolfuro ed è pesantemente glicosilata, coerente con il suo ruolo di glicoproteina di fusione dell'involucro virale.
• La localizzazione subcellulare include la membrana del virione, il compartimento intermedio tra reticolo endoplasmatico e apparato di Golgi dell'ospite e la membrana cellulare dell'ospite.
• Contribuisce all'evasione immunitaria virale inibendo le risposte immunitarie innate dell'ospite e contrastando la restrizione della tetherina (BST-2).
• Il dominio dello stelo di S contiene tre cerniere, fornendo una libertà orientazionale inaspettata al dominio della testa, probabilmente aiutando il legame del recettore (PubMed:32817270). Riferimenti correlati: PMID:32817270

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è stato prodotto contro un frammento ricombinante della proteina 3CLpro; la potenziale reattività crociata con la glicoproteina Spike (P0DTC2) dovrebbe essere convalidata nel contesto del saggio specifico.
• Per il Western blotting (WB), si prevede una banda vicino a 141 kDa in condizioni riducenti; ottimizzare la preparazione del campione e la diluizione dell'anticorpo per minimizzare il legame aspecifico.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC), considerare l'uso di fissazione con paraformaldeide al 4% e permeabilizzazione con Triton X-100 allo 0,1%; includere controlli appropriati per confermare la specificità della colorazione.
• Per le applicazioni ELISA, titolare sia l'anticorpo che l'antigene per ottenere un robusto rapporto segnale-rumore; la reattività crociata con altre proteine coronaviriche potrebbe richiedere una valutazione.

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