Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-SQSTM1 per WB, ELISA - Q64337

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di SQSTM1

• SQSTM1, noto anche come sequestosoma-1 o p62, è una proteina adattatrice citoplasmatica indotta da stress che funge da recettore per l'autofagia selettiva collegando aggregati proteici ubiquitinati al macchinario autofagico.
• Riconoscimento del carico autofagico: Come recettore per l'autofagia selettiva, SQSTM1 collega il carico ubiquitinato agli autofagosomi. Subisce una separazione di fase liquido-liquido dopo il legame con proteine ubiquitinate tramite il suo dominio UBA, formando corpi p62 che vengono poi reclutati negli autofagosomi attraverso l'interazione del suo motivo LIR con le proteine della famiglia ATG8, portando alla degradazione autofagica del carico. Riferimenti correlati: PMID:25723488, PMID:33397898
• Segnalazione citoprotettiva: SQSTM1 interagisce con KEAP1, sequestrandolo in corpi di inclusione e prevenendo così la degradazione mediata da KEAP1 di NFE2L2/NRF2. Ciò porta all'accumulo nucleare di NRF2 e all'espressione di geni antiossidanti e citoprotettivi. Riferimenti correlati: PMID:20173742, PMID:20421418, PMID:24011591
• Regolazione della via NF-kappa-B: SQSTM1 agisce come adattatore che media l'interazione tra TRAF6 e CYLD, influenzando così l'attivazione di NF-kappa-B in risposta a citochine come TNF, NGF e interleuchina-1. Riferimenti correlati: PMID:14960283, PMID:18382763
• Localizzazione subcellulare: SQSTM1 si localizza in aggregati citoplasmatici (corpi p62), autofagosomi, endosomi tardivi, lisosomi e nel nucleo (corpi PML). Si trova anche nel reticolo endoplasmatico e nei sarcomeri delle miofibrille, riflettendo le sue diverse funzioni nel controllo di qualità delle proteine e nella segnalazione.
• Modificazioni post-traduzionali e caratteristiche strutturali: La proteina è soggetta ad acetilazione, fosforilazione, ubiquitinazione e palmitoilazione, e contiene domini zinc-finger. Queste modifiche ne regolano l'attività, la localizzazione e la stabilità.
• Distribuzione tissutale: SQSTM1 è ampiamente espresso in vari tessuti, in linea con i suoi ruoli fondamentali nell'omeostasi cellulare e nelle risposte allo stress.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 250-350 di SQSTM1 di topo, una regione che può includere parti del dominio PB1 e sequenze linker. La natura policlonale di questo anticorpo può riconoscere più epitopi, fornendo un segnale robusto nel western blot (WB).
• Per il WB, ci si aspetta una banda vicino a 48 kDa, ma a causa della tendenza di SQSTM1 a formare aggregati e subire modificazioni post-traduzionali, potrebbero comparire anche specie a peso molecolare più elevato. Per minimizzare l'aggregazione, riscaldare i campioni nel buffer di caricamento riducente prima dell'elettroforesi.
• Per l'ELISA, considerare l'uso di proteina SQSTM1 ricombinante o del peptide immunizzante come antigene di rivestimento. Si raccomanda la titolazione sia dell'anticorpo che dell'antigene per un rapporto segnale-rumore ottimale.
• La reattività incrociata con umano, topo e ratto è supportata dall'omologia di sequenza; tuttavia, si suggerisce una validazione individuale nel campione specifico e nell'applicazione.

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