PolymAb® di coniglio anti-STIM1 per WB, IHC-P, IP, ELISA - Q13586

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di STIM1

• STIM1 agisce come sensore di Ca²⁺ che controlla due importanti canali di Ca²⁺ rettificanti verso l'interno sulla membrana plasmatica: i canali Ca²⁺ attivati dal rilascio di Ca²⁺ (CRAC) e i canali selettivi per il Ca²⁺ regolati dall'arachidonato (ARC), svolgendo un ruolo centrale nell'omeostasi del calcio. Riferimenti correlati: PMID:15866891 PMID:16005298 PMID:16208375

• In seguito alla deplezione delle riserve di Ca²⁺ del reticolo endoplasmatico (RE), STIM1 oligomerizza e trasloca dalla membrana del RE alle giunzioni tra RE e membrana plasmatica, dove attiva direttamente le subunità dei canali CRAC ORAI1, ORAI2 e ORAI3, generando un ingresso di Ca²⁺ sostenuto e oscillatorio. Riferimenti correlati: PMID:16537481 PMID:32415068

• STIM1 è coinvolto nella formazione dello smalto dentale, evidenziando il suo ruolo nei processi di calcificazione specifici dei tessuti. Riferimenti correlati: PMID:24621671

• La proteina regola negativamente la risposta all'interferone di tipo I trattenendo l'adattatore di segnalazione STING nel reticolo endoplasmatico, impedendone così l'attivazione e la successiva segnalazione immunitaria. Riferimenti correlati: PMID:30643259

• STIM1 è espresso ubiquitariamente in varie cellule primarie umane e linee cellulari tumorali, sottolineando il suo ruolo fondamentale nella fisiologia cellulare.

• A livello subcellulare, STIM1 è localizzato nella membrana cellulare, nella membrana del reticolo endoplasmatico, nel citoplasma, nel citoscheletro e nel reticolo sarcoplasmatico, in accordo con la sua funzione dinamica di navetta.

• Le modifiche post-traduzionali includono la glicosilazione N-linked e la fosforilazione, che possono regolarne la stabilità e l'attività. La proteina contiene un peptide segnale, una singola elica transmembrana e un dominio citoplasmatico a coiled-coil.

• Lo splicing alternativo genera molteplici isoforme, che possono presentare un'espressione specifica dei tessuti o proprietà funzionali distinte.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 530–685, una regione all'interno del segmento citoplasmatico C-terminale di STIM1. Questo design può favorire il rilevamento della proteina a lunghezza intera e di alcune varianti di splicing, ma potrebbe non rilevare le isoforme prive di questa regione. Convalidare il prodotto nella linea cellulare o nel tessuto target.

• Per il Western blot, si prevede una banda predominante intorno a 77 kDa, sebbene possano comparire bande aggiuntive dovute alla glicosilazione o allo splicing alternativo. Utilizzare controlli di caricamento appropriati e confermare la specificità con controlli negativi (ad esempio, knockdown con siRNA o knockout con CRISPR, se disponibili).

• Nell'immunoistochimica (IHC-P), il metodo di recupero antigenico e la diluizione dell'anticorpo devono essere ottimizzati, poiché la localizzazione intracellulare di STIM1 può richiedere la permeabilizzazione. Includere controlli isotipici appropriati e convalidare la colorazione utilizzando tessuti positivi e negativi noti.

• Per l'immunoprecipitazione (IP), preincubare l'anticorpo con microsfere di proteina A/G per una cattura efficiente e valutare il cross-linking per evitare l'interferenza delle catene pesanti/leggere nel WB successivo. Confermare la co-precipitazione di partner di interazione noti, come ORAI1.

• Per l'ELISA, titolare l'anticorpo contro l'immunogeno o il lisato cellulare per determinare le condizioni ottimali di rivestimento e rilevamento. Abbinarlo a un anticorpo di rilevamento compatibile o a un anticorpo secondario coniugato per i formati ELISA sandwich.

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