Anticorpo Policlonale Coniglio Anti-TFAM per WB, IF/ICC, ELISA - Q00059

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione del TFAM

• TFAM (Fattore di Trascrizione A, Mitocondriale), noto anche come MtTF1, TCF-6 e TCF6L2, è un fattore di trascrizione mitocondriale codificato nel nucleo chiave che regola l'espressione genica mitocondriale.
• Forma il complesso di inizio della trascrizione mitocondriale con TFB2M e POLRMT, essenziale per la trascrizione basale del DNA mitocondriale (mtDNA).
  Riferimenti correlati: PMID:29149603
• TFAM si lega ai promotori del filamento leggero e HSP1, piegando il DNA in una curva a U tramite i suoi domini HMG-box per reclutare POLRMT e facilitare l'inizio della trascrizione.
  Riferimenti correlati: PMID:22037172, PMID:1737790
• Oltre alla trascrizione, TFAM è critico per la manutenzione e l'imballaggio del mtDNA; compatta il mtDNA in nucleoidi e il suo dosaggio regola strettamente il numero di copie del mtDNA.
  Riferimenti correlati: PMID:19304746, PMID:22841477, PMID:22037171
• In cooperazione con TFB2M, TFAM consente l'apertura del promotore e l'intrappolamento del filamento non stampato del DNA, un passaggio cruciale per una trascrizione accurata.
  Riferimenti correlati: PMID:20410300
• TFAM si localizza nella matrice mitocondriale e nei nucleoidi, dove gioca anche un ruolo nello svolgimento e nell'organizzazione del mtDNA.
• Subisce splicing alternativo e fosforilazione; le varianti associate alla malattia sono collegate a disturbi mitocondriali primari.
• Come membro della famiglia HMGB, TFAM utilizza le sue scatole HMG in tandem per legare, piegare e formare anelli nel mtDNA, contribuendo all'architettura del nucleoide.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale 1–220 del TFAM umano, che include i domini HMG-box in tandem; pertanto, ci si aspetta che l'anticorpo riconosca il TFAM a lunghezza intera.
• Per il Western blotting, considerare l'utilizzo di lisati arricchiti di mitocondri per una rilevazione ottimale; il peso molecolare previsto è di ~29 kDa, ma le modifiche post-traduzionali potrebbero causare uno spostamento.
• Per l'immunofluorescenza/IF e l'ICC, prevedere un pattern di colorazione puntiforme mitocondriale; si raccomanda la colorazione concomitante con un marcatore mitocondriale per confermare la localizzazione.
• Quando si esegue l'ELISA, titolare l'anticorpo contro TFAM ricombinante o lisati cellulari per stabilire le diluizioni di lavoro ottimali.
• A causa dell'alta conservazione della sequenza tra umano, topo e ratto, la reattività incrociata è probabile, ma validare l'anticorpo nel proprio sistema modello.

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