Anticorpo policlonale di coniglio anti-TFEB per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P19484

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di TFEB

• Il fattore di trascrizione EB (TFEB), membro della famiglia MiT/TFE (noto anche come bHLHe35), funge da regolatore principale della biogenesi lisosomiale, dell'autofagia e del metabolismo energetico (PubMed:21617040, PubMed:22343943, PubMed:22576015). Riferimenti correlati: PMID:21617040 PMID:22343943 PMID:22576015
• La disponibilità di nutrienti controlla l'attività di TFEB: la fosforilazione dipendente da MTOR favorisce la ritenzione citosolica; la defosforilazione indotta dalla privazione di nutrienti attiva l'importazione nucleare e l'attivazione trascrizionale dei geni lisosomiali e autofagici (PubMed:22343943, PubMed:22576015, PubMed:22692423). Riferimenti correlati: PMID:22343943 PMID:22576015 PMID:22692423
• La dimerizzazione con altri membri della famiglia MiT/TFE, come TFE3 o MITF, è necessaria per un legame efficiente al DNA nelle sequenze promotrici E-box e CLEAR-box (PubMed:1748288, PubMed:19556463, PubMed:29146937). Riferimenti correlati: PMID:1748288 PMID:19556463 PMID:29146937
• TFEB regola il posizionamento lisosomiale inducendo l'espressione di PIP4P1 e promuove l'autofagia in condizioni di privazione di glucosio in cooperazione con ACSS2 (PubMed:29146937, PubMed:28552616). Riferimenti correlati: PMID:29146937 PMID:28552616
• Nell'immunità adattativa, TFEB attiva l'espressione di CD40L nelle cellule T, contribuendo alle risposte anticorpali dipendenti dal timo (per similitudine).
• La proteina è localizzata nel nucleo, nel citoplasma e nella membrana lisosomiale; il suo passaggio tra questi compartimenti è regolato dinamicamente dai segnali nutrizionali e di stress.
• Durante un'infezione batterica, l'alchilazione di TFEB mediata dall'itaconato induce la traslocazione nucleare e la biogenesi lisosomiale, facilitando l'eliminazione batterica (PubMed:35662396). Riferimenti correlati: PMID:35662396
• TFEB svolge inoltre un ruolo nella vascolarizzazione placentare (per similitudine) ed è soggetto a molteplici modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione e ubiquitinazione.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende la regione C-terminale (amminoacidi 391-461) di TFEB umano, che può riconoscere TFEB a lunghezza intera e possibilmente varianti con modifiche post-traduzionali; validare nel sistema campione pertinente per confermare la specificità.
• Per il Western blot, è prevista una banda intorno a 52 kDa; si consiglia di considerare protocolli di frazionamento nucleare/citoplasmatico per monitorare la traslocazione di TFEB in risposta agli stimoli.
• Per IHC-P, è necessario ottimizzare il recupero antigenico e la diluizione dell'anticorpo primario; includere tessuti di controllo positivo noti per esprimere TFEB (ad es. rene, fegato) e controlli negativi appropriati.
• Per IF/ICC, assicurarsi che le condizioni di fissazione e permeabilizzazione preservino la morfologia nucleare; la co-colorazione con marcatori lisosomiali può valutare lo stato di attivazione di TFEB.
• Quando si utilizza l'ELISA, titolare attentamente l'anticorpo e includere adeguati passaggi di bloccaggio e lavaggio per ridurre al minimo il fondo aspecifico.

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