Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-TGF beta Recettore II (TGFBR2) per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P37173

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione del Recettore TGF-beta di Tipo-2

• Identità e struttura del recettore: Il recettore TGF-beta di tipo 2 (TGFBR2) è una serina/treonina chinasi transmembrana di tipo I a passaggio singolo che funge da recettore ad alta affinità per le citochine TGF-beta TGFB1, TGFB2 e TGFB3. È codificato dal gene TGFBR2 sul cromosoma umano 3, con splicing alternativo che produce multiple isoforme, alcune delle quali sono associate a cancro colorettale ereditario non poliposico, aneurisma aortico e craniosinostosi.
• Segnalazione canonica dipendente da SMAD: Dopo il legame del ligando, TGFBR2 si associa a due recettori di tipo I (TGFBR1) per formare un complesso eterotetramerico. Il dominio chinasico costitutivamente attivo di TGFBR2 fosforila TGFBR1, che a sua volta attiva SMAD2 e SMAD3. Gli SMAD fosforilati si complessano con SMAD4 e si traslocano nel nucleo per regolare la trascrizione dei geni bersaglio di TGF-beta, controllando l'arresto del ciclo cellulare, l'apoptosi, la differenziazione e la produzione di matrice extracellulare.
• Segnalazione non canonica: Oltre alla via canonica SMAD, TGFBR2 coinvolge cascate indipendenti da SMAD, incluse le vie della chinasi MAP, PI3K/AKT e delle GTPasi simili a Rho, per modulare la migrazione, la proliferazione e la sopravvivenza cellulare.
• Legame del ligando e affinità: TGFBR2 lega TGFB1, TGFB2 e TGFB3 nell'intervallo di affinità picomolare senza richiedere co-recettori, mediando il passo iniziale della trasduzione del segnale TGF-beta.
• Localizzazione subcellulare: TGFBR2 si localizza principalmente sulla membrana cellulare e nei raft di membrana, con evidenza di una forma secreta rilevata negli ambienti extracellulari, coerente con il suo ruolo nella comunicazione cellula-cellula.
• Modificazioni post-traduzionali: Il recettore è una glicoproteina con multipli legami disolfuro intramolecolari essenziali per la sua struttura terziaria. Subisce fosforilazione a livello di residui di serina e treonina all'interno del suo dominio chinasico e della coda citoplasmatica, il che modula l'attività e la segnalazione a valle.
• Riepilogo parole chiave: La scheda UniProt evidenzia il suo coinvolgimento in apoptosi, regolazione della crescita, differenziazione e associazioni con malattie tra cui aneurisma aortico, craniosinostosi e cancro colorettale ereditario non poliposico.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Progettazione dell'immunogeno: L'anticorpo è stato generato contro una proteina ricombinante che comprende gli amminoacidi 23–280 del TGFBR2 umano, che copre il dominio extracellulare N-terminale di legame del ligando. Questa regione è relativamente conservata tra umano, topo e ratto, spiegando la reattività crociata osservata; tuttavia, i pattern di glicosilazione endogena possono influenzare l'accessibilità dell'epitopo nei campioni nativi.
• Considerazioni per il Western blot (WB): Il peso molecolare previsto di TGFBR2 è di circa 65 kDa; tuttavia, a causa della glicosilazione, si potrebbe osservare uno spostamento della banda. Utilizzare condizioni riducenti per una chiara risoluzione. Validare in lisati di controllo positivo (es. HeLa, A549) noti per esprimere TGFBR2.
• Suggerimenti per l'Immunoistochimica (IHC-P): Per sezioni incluse in paraffina, ottimizzare il recupero dell'antigene (es. buffer citrato pH 6.0 o EDTA pH 9.0) e considerare di testare multiple concentrazioni dell'anticorpo primario (intervallo tipico 1:50–1:500). È attesa una colorazione di membrana; l'inclusione di un inibitore della fosfatasi nei buffer di blocco può aiutare a preservare epitopi dipendenti dalla fosforilazione.
• Guida per l'Immunofluorescenza (IF/ICC): Poiché TGFBR2 è un recettore transmembrana, è necessaria la permeabilizzazione con Triton X-100 o saponina per il rilevamento di epitopi intracellulari. È consigliata una co-colorazione con marcatori di membrana o organelli per confermare la localizzazione. L'anticorpo potrebbe anche riconoscere la forma secreta, quindi si consiglia una fissazione accurata per evitare fondo extracellulare.
• Utilizzo in ELISA: Questo anticorpo policlonale può essere esplorato come reagente di cattura o di rilevamento in formati ELISA sandwich. Eseguire titolazioni a scacchiera per determinare le concentrazioni ottimali di rivestimento (1–10 µg/mL) e di rilevamento e validare con standard proteici ricombinanti di TGFBR2.

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