Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-TNF-α per WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P01375

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione del TNF-α

• Il TNF-α è una citochina omotrimerica che esiste sia come precursore transmembrana di tipo II di 26 kDa che come forma solubile di 17 kDa generata da taglio proteolitico. La sua struttura include un dominio intracellulare, un'elica transmembrana singola e un dominio extracellulare C‑terminale legante il recettore.
• Codificato dal gene TNF (alias TNFA, TNFSF2) sul cromosoma umano 6, il TNF‑α è un membro prototipico della superfamiglia del fattore di necrosi tumorale, che comprende 19 ligandi che regolano processi biologici diversi.
• Il TNF‑α segnala principalmente attraverso due recettori, TNFRSF1A/TNFR1 e TNFRSF1B/TNFBR. Viene secreto principalmente da macrofagi attivati ed esercita effetti pleiotropici tra cui l'induzione dell'apoptosi in alcune linee cellulari tumorali, la febbre (pirogenicità) e la cachessia.
• Nell'artrite reumatoide, il TNF‑α compromette la funzione delle cellule T regolatorie aumentando l'espressione della proteina fosfatasi 1 (PP1), che defosforila il residuo chiave Ser‑418 di FOXP3, causando disabilità funzionale dei Treg. Riferimenti correlati: PMID:23396208
• Il TNF‑α agisce come un mediatore chiave della morte cellulare nell'azione antitumorale dei neutrofili stimolati da BCG combinati con un mimetico DIABLO/SMAC, dimostrato nella linea cellulare di cancro alla vescica RT4v6. Riferimenti correlati: PMID:16829952, PMID:22517918, PMID:23396208
• Sinergicamente con IL‑1B e IL‑6, il TNF‑α induce la produzione di VEGF, promuovendo così l'angiogenesi. Riferimenti correlati: PMID:12794819
• La localizzazione subcellulare è dinamica: la proteina a lunghezza intera risiede nella membrana cellulare, mentre l'ectodominio clivato viene secreto. Il dominio intracellulare (ICD) può traslocare nel nucleo e stimolare la produzione di IL‑12 nelle cellule dendritiche.
• Le modificazioni post-traduzionali includono glicosilazione, miristoilazione, fosforilazione e formazione di ponti disolfuro, tutte critiche per il corretto ripiegamento, l'attività e la stabilità.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione C‑terminale (aa 134–233) del TNF-α umano, che si trova all'interno della porzione matura e secreta. L'anticorpo policlonale risultante può riconoscere sia le forme legate alla membrana che quelle solubili della citochina.
• Per il western blot, una banda a circa 26 kDa rappresenta il precursore transmembrana a lunghezza intera, mentre una banda a ~17 kDa indica la forma solubile rilasciata. Utilizzare lisati di macrofagi o monociti stimolati con LPS come controlli positivi.
• Nell'immunoistochimica, le sezioni incluse in paraffina possono richiedere il recupero dell'antigene mediato dal calore. Considerare di testare tessuti noti per essere ricchi di TNF‑α come linfonodi infiammati o sinovia reumatoide.
• Quando si applica l'immunofluorescenza o l'ELISA, convalidare la specificità dell'anticorpo utilizzando TNF‑α ricombinante o linee cellulari positive/negative rilevanti che esprimono il bersaglio.

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