Anticorpo Monoclonale Anti-TNF-alfa per WB, IF/ICC, ELISA - P06804

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione del TNF-alfa

• Il fattore di necrosi tumorale (TNF-alfa, cachectina, TNFSF2) è una citochina pro-infiammatoria chiave appartenente alla superfamiglia dei ligandi del fattore di necrosi tumorale.
• Secreto principalmente dai macrofagi, il TNF-alfa si lega a TNFRSF1A/TNFR1 e TNFRSF1B/TNFBR, induce la morte cellulare in alcune linee di cellule tumorali e agisce come potente pirogeno.
• In determinate condizioni, il TNF-alfa può stimolare la proliferazione e la differenziazione cellulare e svolge un ruolo nell'angiogenesi induttendo VEGF in sinergia con IL1B e IL6.
• Il TNF-alfa induce resistenza insulinica negli adipociti attraverso l'inibizione della fosforilazione della tirosina IRS1 e l'assunzione di glucosio, un processo parzialmente mediato dalla degradazione della proteina GKAP42. Riferimenti correlati: PMID:25586176
• Promuove l'osteoclastogenesi e il riassorbimento osseo. Riferimenti correlati: PMID:32741026
• La forma del dominio intracellulare (ICD) del TNF induce la produzione di IL12 nelle cellule dendritiche.
• A livello subcellulare, il TNF-alfa si trova sulla membrana cellulare ed è anche secreto; contiene un segnale di ancoraggio, un'elica transmembrana e subisce modificazioni post-traduzionali tra cui glicosilazione, legami disolfuro e fosforilazione.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno (aa 80-235) bersaglia il dominio extracellulare del TNF-α di topo, coprendo la regione di legame al recettore; si prevede che riconosca sia la forma legata alla membrana sia quella solubile secreta.
• Per il Western blotting, si può osservare una banda principale intorno ai 26 kDa; bande aggiuntive o spostamenti possono derivare da glicosilazione o processo proteolitico: convalidare utilizzando controlli appropriati.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica, considerare protocolli di permeabilizzazione per bilanciare la rilevazione del TNF intracellulare e ancorato alla membrana: il segnale può apparire nell'apparato di Golgi, sulla membrana plasmatica o come punteggiatura secreta, a seconda del tipo cellulare e della stimolazione.
• Per l'ELISA, la compatibilità dell'accoppiamento di anticorpi deve essere valutata se utilizzata come anticorpo di cattura/di rilevazione in saggi sandwich; la reattività crociata con altri membri della superfamiglia TNF è improbabile in base alla progettazione dell'immunogeno, ma deve essere confermata.

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