Anticorpo policlonale coniglio anti-TNFSF13B per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q9Y275

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di TNFSF13B

• TNFSF13B (noto anche come BAFF, BlyS o TALL-1) è una citochina appartenente alla superfamiglia dei ligandi del fattore di necrosi tumorale (TNF), con due principali isoforme generate da splicing alternativo; l'isoforma 1 è la forma completa bioattiva, mentre l'isoforma 2 può inibire la secrezione e la funzione dell'isoforma 1.
• Come principale regolatore dell'omeostasi delle cellule B, TNFSF13B si lega ai recettori TNFRSF13B (TACI) e TNFRSF17 (BCMA) e, insieme al ligando APRIL, forma una via a due ligandi e due recettori che stimola la funzione delle cellule B e T e modula l'immunità umorale.
• La sua interazione con il recettore specifico per BAFF, BAFFR (BR3), fornisce un critico segnale di sopravvivenza per le cellule B mature e governa il numero di cellule B periferiche e la risposta delle cellule B.
• Oltre al suo ruolo di citochina, TNFSF13B può agire come fattore di trascrizione per il proprio gene in complesso con NF-κB p50, in particolare nelle malattie autoimmuni e proliferative delle cellule B; l'isoforma Delta4BAFF è essenziale per il rilascio di BAFF solubile da parte dei monociti stimolati da IFN-γ e per la sopravvivenza delle cellule B.
• A livello subcellulare, TNFSF13B è espresso come una proteina transmembrana di tipo II sulla membrana cellulare, ma può essere clivato e secreto come citochina solubile.
• L'espressione tissutale è abbondante nei leucociti del sangue periferico, specialmente nei monociti e macrofagi, ed è presente anche nella milza, nel linfonodo, nel midollo osseo, nelle cellule T e nelle cellule dendritiche, con livelli inferiori nella placenta, nel cuore, nel polmone e nei tessuti fetali; l'isoforma 2 è espressa in molte linee cellulari mieloidi.
• Le modifiche post-traduzionali includono glicosilazione N-legata e un legame disolfuro; la proteina contiene un'elica transmembrana e un dominio di omologia TNF conservato, ed è classificata sotto parole chiave come citochina, immunità e proteina secreta.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde al dominio extracellulare (aa 90-160) di TNFSF13B umano, una regione altamente conservata tra le specie; questo design supporta la reattività crociata osservata con topo e ratto.
• Per il Western blotting, il peso molecolare teorico è di circa 31 kDa; si raccomandano condizioni riducenti per il rilevamento, ma si noti che la glicosilazione può causare un leggero spostamento verso l'alto.
• Quando si esegue l'immunoistochimica (IHC-P), metodi di recupero dell'antigene come il recupero dell'epitopo indotto dal calore (HIER) possono migliorare il segnale; una sezione di tessuto fissato in formalina e incluso in paraffina (FFPE) di tonsilla umana o linfonodo è un adeguato controllo positivo.
• Per l'immunofluorescenza indiretta (IF/ICC), considerare la permeabilizzazione per rilevare sia i pool di membrana che intracellulari, poiché TNFSF13B può essere secreto e può essere presente nel Golgi.
• Nelle applicazioni ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento; si consiglia l'abbinamento con un anticorpo monoclonale o un altro anticorpo policlonale contro un epitopo non sovrapposto per saggi immunoassay a sandwich.
• Essendo un anticorpo policlonale, la coerenza tra lotti deve essere verificata; includere sempre appropriati controlli positivi e negativi per confermare la specificità nel sistema di campione scelto.

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