Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-TriMetil-Istona H3-K9 (Q16695/P68431) per l'epigenetica

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione dell'Istona H3

• Funzione: L'Istona H3 è un componente fondamentale del nucleosoma, che avvolge e compatta il DNA nella cromatina per regolare la trascrizione, la riparazione del DNA, la replicazione e la stabilità cromosomica. Le modifiche post-traduzionali degli istoni, note come codice istonico, modulano la struttura della cromatina e l'espressione genica.
• Localizzazione subcellulare: Localizzata prevalentemente nel nucleo e associata ai cromosomi per tutto il ciclo cellulare.
• Specificità tissutale: La variante dell'istona H3 H3.1t (Q16695) è espressa specificamente nelle cellule testicolari, mentre l'istona canonica H3.1 (P68431) è espressa ubiquitous in tutti i tessuti.
• Modifiche post-traduzionali: L'Istona H3 è soggetta a una vasta gamma di modifiche covalenti, e la lisina 9 è un sito regolatore chiave. La lisina 9 può subire citrullinazione (conversione dell'arginina in citrullina) PMID:15345777 PMID:16567635 e dimetilarginina simmetrica. Inoltre, la trimetilazione della lisina 9 (H3K9me3) è un marcatore di cromatina repressiva ben caratterizzato. Questo anticorpo rileva specificamente l'Istona H3 trimetilata alla lisina 9. Riferimenti correlati: PMID:15345777, PMID:16567635

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Progettazione dell'immunogeno: L'anticorpo è stato prodotto contro un peptide sintetico trimetilato che comprende la lisina 9 dell'Istona H3 umana. Quando si utilizza questo anticorpo, si consiglia di convalidarne la specificità testandolo su peptide H3 non modificato o peptidi con modifiche alternative (ad esempio monometile, dimetile, acetile) per confermare la selettività per lo stato trimetilato.
• Western Blot (WB) e Dot Blot (DB): Per il WB, utilizzare protocolli standard di estrazione degli istoni (estrazione acida o ad alta concentrazione salina) per arricchire le proteine basiche. Garantire un blocco adeguato e una corretta diluizione dell'anticorpo per ridurre al minimo il legame non specifico. Per il DB, verificare se necessaria la reattività crociata con altre modifiche istoniche.
• Immunofluorescenza/Immunocitochimica (IF/ICC): Ottimizzare le condizioni di permeabilizzazione e fissazione per preservare la morfologia nucleare e l'accessibilità dell'antigene. La co-colorazione con DAPI può aiutare a confermare la localizzazione nucleare.
• ELISA: Utilizzabile per screening ad alto rendimento; si consiglia di rivestire le piastre con peptidi sintetici metilati e non metilati per valutare la specificità.
• Immunoprecipitazione della cromatina (ChIP, ChIP-seq) e CUT&Tag: Questo anticorpo è adatto per l'arricchimento basato su ChIP della cromatina marcata con H3K9me3. È possibile utilizzare sia ChIP a legami incrociati (X-ChIP) che ChIP nativa (N-ChIP); convalidare utilizzando loci genomici di controllo positivo e negativo (ad esempio eterocromatina vs promotori attivi). Per il CUT&Tag, seguire i protocolli pubblicati per applicazioni a basso input o a singola cellula. Convalidare l'anticorpo nel proprio sistema di campioni prima di esperimenti su larga scala.

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