Anti-UBA1/7 Rabbit PolymAb® per WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P22314 / P41226

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di UBA1/7

• UBA1 (enzima 1 attivatore di modificatori simili all'ubiquitina) è il principale enzima E1 che avvia la coniugazione dell'ubiquitina, indirizzando le proteine alla degradazione proteasomica (PubMed:1447181, PubMed:1606621, PubMed:33108101). Riferimenti correlati: PMID:1447181 PMID:1606621 PMID:33108101
• Attiva l'ubiquitina mediante adenilazione ATP-dipendente della sua glicina C-terminale, formando un intermedio tioestere ubiquitina-E1 essenziale per il successivo trasferimento E2/E3 (PubMed:1447181). Riferimenti correlati: PMID:1447181
• UBA1 svolge un ruolo cruciale nella risposta al danno del DNA, facilitando la formazione di focolai indotti dalle radiazioni e il reclutamento di proteine di riparazione come TP53BP1 e BRCA1 nei siti di danno (PubMed:22456334). Riferimenti correlati: PMID:22456334
• La proteina è localizzata in più compartimenti subcellulari, inclusi citoplasma, nucleo e mitocondri, in linea con i suoi diversi ruoli funzionali.
• UBA1 è espressa ubiquitariamente nei tessuti; la sua presenza è stata confermata a livello proteico negli eritrociti.
• Le modifiche post-traduzionali di UBA1 includono acetilazione e fosforilazione, mentre le mutazioni del gene sono associate a disturbi neurodegenerativi e alla sindrome VEXAS.
• La proteina UBA7 (enzima 7 attivatore di modificatori simili all'ubiquitina) è un enzima E1 correlato con specificità distinta per ISG15, ma condivide l'omologia strutturale con UBA1, consentendo il riconoscimento crociato da parte di questo anticorpo.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Il peptide immunogeno (aa959-1058 di UBA1) si trova in una regione che condivide una significativa omologia con UBA7, spiegando la specificità per entrambi i bersagli. Validare la specificità utilizzando controlli di knockdown o knockout nei propri campioni.
• Nel Western blot (WB), si prevedono bande predominanti a ~118 kDa per UBA1 e ~112 kDa per UBA7, con possibili variazioni a seconda delle modifiche post-traduzionali o delle isoforme di splicing.
• Per l'immunofluorescenza (IF) e l'immunoistochimica (IHC), si noti che UBA1 è distribuita nel citoplasma, nel nucleo e nei mitocondri; ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione per preservare il segnale in questi compartimenti.
• Per le applicazioni ELISA, considerare l'utilizzo di proteina UBA1 ricombinante o di lisati cellulari addizionati con il bersaglio come standard, ed eseguire test di reattività crociata contro UBA7 per confermare il rilevamento.
• In quanto anticorpo monoclonale ricombinante di coniglio (Rabbit PolymAb®), questo reagente offre un'elevata uniformità tra i diversi lotti; tuttavia, le diluizioni di lavoro ottimali devono essere determinate empiricamente per ciascun saggio e tipo di campione.

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