Anticorpo policlonale coniglio anti-UBE2C per WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - O00762

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di UBE2C

• UBE2C (UBCH10) è un membro della famiglia degli enzimi coniuganti ubiquitina (E2), responsabile dell'accettazione dell'ubiquitina dall'enzima E1 e della catalisi del suo trasferimento ai substrati.
• La proteina è un cofattore essenziale del complesso promuovente l'anafase/ciclosoma (APC/C), una critica ligasi E3 ubiquitina che regola la progressione mitotica targettizzando substrati chiave per la degradazione proteasomica.
• UBE2C catalizza principalmente catene poliubiquitinate legate a 'Lys-11', un legame non canonico cruciale per il riconoscimento del substrato APC/C e la successiva degradazione.
• Oltre alle catene Lys-11, UBE2C può mediare anche la poliubiquitinazione legata a 'Lys-48' in vitro, evidenziando la sua versatilità nella formazione delle catene di ubiquitina.
• Lo splicing alternativo del gene UBE2C può generare multiple varianti di trascritto, potenzialmente producendo isoforme con proprietà regolatorie distinte.
• Le modificazioni post-traduzionali, inclusa la fosforilazione e l'acetilazione, sono indicate dalle parole chiave UniProt, suggerendo una regolazione dinamica dell'attività di UBE2C durante il ciclo cellulare.
• La proteina è altamente conservata tra le specie, permettendo la reattività crociata con ortologhi di topo e ratto, come confermato dalla validazione dell'anticorpo.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno a lunghezza intera (aa 1-179) può permettere il riconoscimento di tutte le isoforme UBE2C; pertanto, potrebbero essere osservate bande di peso molecolare leggermente diverso in alcuni tessuti o stati cellulari.
• Per il Western blotting, utilizzare lisati di cellule arrestate in mitosi (es. trattamento con nocodazolo) come controllo positivo, poiché i livelli di UBE2C raggiungono il picco durante la mitosi. È prevista una banda vicino a 20 kDa.
• Per l'immunoistochimica (IHC-P) e l'immunofluorescenza (IF/ICC), considerare il recupero dell'antigene indotto dal calore con tampone citrato (pH 6.0) e validare in tessuti noti positivi, come tumori altamente proliferativi o testicoli.
• Nell'immunoprecipitazione (IP), l'anticorpo policlonale può arricchire UBE2C e i suoi partner interagenti; si raccomanda la pre-pulizia con IgG di controllo per ridurre il legame non specifico.
• Per l'ELISA, ottimizzare la concentrazione dell'antigene di rivestimento e la diluizione dell'anticorpo utilizzando la proteina UBE2C ricombinante come standard; notare che gli anticorpi policlonali possono mostrare una leggera variabilità lotto-per-lotto.
• Includere sempre controlli rilevanti (es. lisati knockout UBE2C) per confermare la specificità, in particolare quando si lavora con campioni in cui l'espressione di UBE2C è bassa o regolata.

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