Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-Ube2N/Ubc13 per WB ed ELISA - P61088

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di Ube2N/Ubc13

• Ube2N (noto anche come Ubc13, UbcH13) è un enzima ubiquitina-coniugante E2 che forma un eterodimero con UBE2V1 o UBE2V2 per catalizzare la sintesi di catene di poliubiquitina non canoniche legate in 'Lys-63'. Questo tipo di poliubiquitinazione non indirizza le proteine alla degradazione proteasomiale, ma svolge invece ruoli regolatori nella segnalazione, nella riparazione del DNA e nel controllo del ciclo cellulare.
• L'enzima svolge un ruolo critico nella via di tolleranza al danno del DNA senza errori, mediando la poliubiquitinazione legata in 'Lys-63' di PCNA in associazione con le ligasi E3 HLTF e SHPRH, essenziale per la riparazione del DNA e la sopravvivenza cellulare dopo stress genotossico.
• Ube2N è coinvolto nella segnalazione immunitaria innata: insieme a RNF135 e UBE2V1, catalizza la poliubiquitinazione legata in 'Lys-63' dipendente da RNA virale di RIG-I per attivare la produzione di interferone beta (PubMed:28469175). Inoltre, l'eterodimero UBE2V1-UBE2N promuove l'attività di restrizione specifica per il capside di TRIM5 generando catene di poliubiquitina che attivano il complesso chinasi TAK1, portando all'espressione di geni infiammatori rispondenti a NF-kB e MAPK (PubMed:31006531). Riferimenti correlati: PMID:28469175 PMID:31006531
• A livello subcellulare, Ube2N si localizza sia nel nucleo che nel citoplasma, in linea con le sue diverse funzioni nella riparazione del DNA (nucleare) e nelle vie di segnalazione citoplasmatiche.
• La proteina è soggetta a modificazioni post-traduzionali tra cui acetilazione e formazione di legami disolfuro, e funziona tramite la formazione di legami isopeptidici durante il trasferimento di ubiquitina. Appartiene alla famiglia degli enzimi ubiquitina-coniuganti E2 ed è classificata nella via di coniugazione Ubl.
• Ube2N è coinvolta nell'attivazione trascrizionale di geni target e svolge un ruolo nella progressione del ciclo cellulare e nella differenziazione. Partecipa anche alla via di segnalazione di IL-17A mediando la poliubiquitinazione legata in 'Lys-63' di TRAF6 insieme a TRAF3IP2.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno utilizzato per generare questo anticorpo policlonale di coniglio comprende la proteina Ube2N umana a lunghezza intera (aa 1–152). Questo design può consentire il riconoscimento di più epitopi, potenzialmente fornendo un rilevamento robusto anche se alcuni epitopi sono mascherati o denaturati. Tuttavia, va considerata la possibile reattività crociata con altri enzimi E2 che condividono regioni conservate; si raccomanda la validazione nel sistema di campioni rilevante.
• L'anticorpo è validato dal fornitore per Western blotting (WB) ed ELISA. Per il WB, ci si aspetta una banda vicina a 17 kDa. Si consiglia di confermare la specificità utilizzando lisati di controllo positivo e negativo, in particolare da cellule umane, di topo o di ratto, data la reattività crociata riportata.
• Data la partecipazione di Ube2N in vie diverse, i ricercatori possono esplorarne l'espressione dinamica o la modificazione in condizioni di danno al DNA, stimolazione immunitaria innata o arresto del ciclo cellulare. I livelli di rilevamento endogeno possono variare; potrebbe essere necessaria l'ottimizzazione della diluizione dell'anticorpo e dei tempi di esposizione.
• Per le applicazioni ELISA, l'abbinamento con un anticorpo di cattura o un antigene adatto può aiutare a stabilire saggi quantitativi. Si consiglia di valutare la linearità e la sensibilità utilizzando la proteina Ube2N ricombinante come standard.

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