Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Ubiquitina per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P0CG47

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione dell'Ubiquitina (Poliubiquitina-B)

• L'Ubiquitina, codificata dal gene UBB, è una proteina altamente conservata di 76 amminoacidi che esiste sia libera (non ancorata) sia legata in modo covalente alle proteine bersaglio tramite un legame isopeptidico. Può formare catene di poliubiquitina legate tramite diversi residui di lisina o catene lineari tramite la metionina iniziale.
• Le catene di poliubiquitina svolgono diverse funzioni: le catene legate in Lys48 indirizzano le proteine alla degradazione proteasomiale; le catene legate in Lys63 sono coinvolte nell'endocitosi, nella riparazione del DNA e nella segnalazione di NF-kappa-B; altri legami (Lys6, Lys11, Lys29, Lys33) regolano processi come la riparazione del DNA, l'ERAD, il ciclo cellulare, la risposta allo stress proteotossico e la modificazione delle chinasi.
• La proteina si localizza nel citoplasma, nel nucleo e nella membrana esterna del mitocondrio, riflettendo i suoi ruoli diffusi nell'omeostasi cellulare e nella segnalazione.
• L'Ubiquitina è soggetta a diverse modificazioni post-traduzionali, tra cui la fosforilazione e l'ADP-ribosilazione, e forma frequentemente legami isopeptidici durante la coniugazione.
• Come membro della famiglia proteica dell'ubiquitina, UBB rappresenta un precursore della poliubiquitina che viene processato in monomeri di ubiquitina maturi, garantendo un approvvigionamento costante per le esigenze cellulari.
• La coniugazione dell'ubiquitina generalmente bersaglia i residui di lisina sui substrati, anche se è stata osservata una rara coniugazione a residui di cisteina o serina, ampliando l'ambito della segnalazione ubiquitinica.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 1-100 dell'Ubiquitina umana, che copre la proteina matura a lunghezza intera, quindi l'anticorpo può riconoscere l'ubiquitina totale. Si consiglia di utilizzare controlli appropriati per distinguere l'ubiquitina non ancorata dalle forme coniugate nei tuoi saggi.
• Per il Western blotting (WB), una banda intorno ai 26 kDa può corrispondere al precursore della poliubiquitina-B, ma i monomeri individuali di ubiquitina (~8,5 kDa) coniugati ai bersagli appariranno come macchie di peso molecolare più elevato. Ottimizza le condizioni di preparazione del campione e di rilevamento per risolvere le specie poliubiquitinate.
• Nell'IHC-P e nell'IF/ICC, verifica la specificità confrontando i pattern di colorazione in tessuti/linee cellulari noti positivi e negativi, e includi un saggio di competizione con peptide di blocco se disponibile.
• Per le applicazioni ELISA, assicurati di utilizzare l'immunogeno ricombinante o l'ubiquitina purificata come standard per convalidare sensibilità e linearità nel tuo sistema di saggio.

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