Anticorpo policlonale coniglio anti-ULK4 per WB, IF/ICC, ELISA - Q96C45

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'ULK4

• ULK4 è una pseudochinasi appartenente alla famiglia delle chinasi simili a Unc-51, nota anche come FAM7C1 e REC01035, ed è caratterizzata dalla mancanza di attività catalitica chinasica, funzionando invece come adattatore molecolare.
• Nella via di segnalazione hedgehog, ULK4 agisce al ciglio primario per mediare l'associazione tra la chinasi STK36 e il fattore di trascrizione GLI2, promuovendo la fosforilazione di GLI2 e il successivo rilascio dall'inibizione di SUFU, consentendo la translocazione nucleare di GLI2 e l'attivazione dei geni bersaglio. Riferimenti correlati: PMID:38096226
• ULK4 è localizzata alle proiezioni cellulari, specificamente al ciglio, coerente con il suo ruolo nella trasduzione del segnale ciliare hedgehog.
• A livello proteico, l'espressione di ULK4 è rilevata principalmente nel cervello, in particolare nei neuroni post-mitotici inclusi i neuroni GABAergici, ed è assente negli astrociti.
• La proteina possiede un dominio di legame dell'ATP e capacità di legame dei nucleotidi, sebbene la sua classificazione come pseudochinasi implichi un utilizzo non canonico dei nucleotidi.
• Contiene più regioni ripetute ed è soggetta a fosforilazione, come indicato dall'identificazione proteomica, suggerendo modifiche post-traduzionali regolatorie.
• La funzione di adattatore dell'ULK4 nell'attivazione di GLI2 è critica per una corretta segnalazione hedgehog, che governa lo sviluppo embrionale, il mantenimento delle cellule staminali e la rigenerazione tissutale.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Per il western blotting, dato l'elevato peso molecolare dell'ULK4 (circa 142 kDa), considerare l'uso di un gel di poliacrilammide a bassa percentuale (es. 6-8%) con tempi di trasferimento estesi per garantire un efficiente trasferimento proteico.
• Nell'immunofluorescenza o immunocitochimica, poiché ULK4 si localizza ai cilia, ottimizzare le condizioni di fissaggio e permeabilizzazione per preservare le strutture ciliari, e confermare la co-localizzazione con marcatori ciliari come la tubulina acetilata o Arl13b.
• Validare la specificità dell'anticorpo nel sistema di campione includendo linee cellulari o tessuti noti per esprimere ULK4 (es. colture neuronali o sezioni cerebrali) ed eseguendo controlli di knockdown/knockout ove possibile.
• Essendo un anticorpo policlonale, la coerenza tra lotti può variare; si consiglia di titolare ogni nuovo lotto e includere appropriati controlli positivi e negativi in ogni esperimento.
• Per le applicazioni ELISA, assicurarsi che l'immunogeno ricombinante o la proteina ULK4 a lunghezza intera vengano utilizzati per il rivestimento per confermare la reattività e determinare le diluizioni di lavoro ottimali.

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