Anticorpo policlonale Anti-USP8 Coniglio per WB, IF/ICC, ELISA - P40818

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di USP8

• USP8, noto anche come idrolasi 8 del terminale carbossilico dell'ubiquitina, è un enzima deubiquitinante che rimuove l'ubiquitina coniugata dalle proteine substrato, regolando così la stabilità e il ricambio proteico.
• Idrolizza sia le catene poliubiquitina legate a Lys-48 che a Lys-63, e la sua attività catalitica è potenziata durante la fase M, collegandola alla regolazione del ciclo cellulare (Parole chiave: Ciclo cellulare, Fosfoproteina).
• USP8 svolge un ruolo critico nel sorting endosomiale e nel traffico di membrana controllando la dinamica dell'ubiquitina sugli endosomi precoci. Deubiquitina EPS15 e mantiene la stabilità di ESCRT-0, preservando così la morfologia dell'endosoma.
• Nella segnalazione dei fattori di crescita, USP8 rimuove l'ubiquitina dal recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR), modulando la degradazione del recettore e l'attività della via MAPK a valle.
• USP8 deubiquitina BACE1, inibendone la degradazione lisosomiale e influenzando la lavorazione della proteina precursore dell'amiloide (APP) e la formazione di amiloide-beta. Riferimenti correlati: PMID:27302062
• Inoltre, USP8 è coinvolto nella regolazione dell'anergia delle cellule T tramite la formazione di un complesso con RNF128 e OTUB1, e contribuisce alla biogenesi dell'acrosoma durante la spermatogenesi.
• Sottocellularemente, USP8 si localizza nel citoplasma, nel nucleo, nella membrana endosomiale e nella membrana cellulare, riflettendo i suoi molteplici ruoli funzionali.
• Le mutazioni in USP8 sono associate alla sindrome di Cushing e ad altri disturbi, sottolineandone il significato clinico (Parole chiave: Variante di malattia, Sindrome di Cushing).

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno copre la regione N-terminale (aa 1-270) di USP8 umano, che può riconoscere più isoforme a causa dello splicing alternativo. Verificare la specificità dell'isoforma nel proprio sistema sperimentale.
• Per il Western blot, aspettarsi una banda principale intorno a 128 kDa in condizioni riducenti. Convalidare il peso molecolare osservato rispetto ai controlli noti e considerare l'uso di un gel a bassa percentuale per una separazione ottimale delle proteine ad alto peso molecolare.
• In IF/ICC, USP8 mostra una localizzazione subcellulare dinamica. Includere appropriati passaggi di permeabilizzazione e blocco; è consigliata una colorazione co-localizzata con marcatori di organelli (es. EEA1 per gli endosomi precoci).
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento, ma le concentrazioni ottimali devono essere determinate empiricamente per ogni formato di saggio.
• Questo anticorpo mostra reattività incrociata confermata con USP8 di topo e ratto. Quando si lavora con modelli di roditori, includere sempre controlli positivi e negativi corrispondenti alla specie per confermare la specificità.

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