Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Vinculina per WB, IF-P, ELISA - P18206

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della Vinculina

• La Vinculina è una proteina legata all'actina altamente conservata che collega le integrine e le caderine al citoscheletro di actina, svolgendo ruoli chiave sia nell'adesione cellula-matrice che cellula-cellula.
• Un'isoforma specifica del muscolo, nota come metavinculina (MV), deriva dallo splicing alternativo e contiene un esone aggiuntivo; è espressa prevalentemente nel muscolo cardiaco e scheletrico.
• La Vinculina si localizza nelle adesioni focali cellula-matrice, nelle giunzioni aderenti cellula-cellula e nella regione perinucleare, nonché in strutture specializzate come i podosomi e il sarcolemma.
• La proteina subisce multiple modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione, acetilazione e palmitoilazione, che regolano la sua attivazione, le interazioni proteiche e il targeting alla membrana.
• La Vinculina agisce come un mecanosensore; i cambiamenti conformazionali indotti dalla tensione espongono siti di legame criptici per la talina e l'F-actina, rafforzando così i complessi di adesione.
• Come componente chiave del complesso caderina-catenina, la vinculina modula l'espressione superficiale di E-caderina e potenzia la mecanosensazione alle giunzioni aderenti, influenzando la morfogenesi e l'omeostasi tissutale.
• Coerentemente con i suoi ruoli essenziali nell'adesione e nella meccanotrasduzione, le mutazioni in VCL sono associate a cardiomiopatia dilatativa (CMD1W) e cardiomiopatia ipertrofica (CMH15).
• Inoltre, la vinculina partecipa alla morfologia cellulare, alla migrazione e all'invasione, come evidenziato dal suo reclutamento nei podosomi e dalla sua influenza sulla dinamica dei lamellipodi.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico corrispondente alla regione C-terminale (aa800-900) della Vinculina umana; questa regione è conservata tra umano, topo e ratto, spiegando la reattività crociata riportata.
• Per il Western blotting, la vinculina migra a un peso molecolare apparente di ~124 kDa; utilizzare percentuali di gel appropriate (ad es. 8% SDS-PAGE) e verificare l'efficienza del trasferimento utilizzando la colorazione delle proteine totali.
• Nell'immunofluorescenza (IF-P), considerare condizioni di fissazione e permeabilizzazione che preservino l'architettura delle adesioni focali e delle giunzioni aderenti (ad es. 4% PFA seguito da 0,1% Triton X-100). La co-colorazione con marcatori di paxillina o F-actina può confermare la localizzazione.
• Quando si esegue l'ELISA, titolare l'anticorpo contro il peptide immunogeno e la proteina nativa per determinare le concentrazioni ottimali; l'adsorbimento crociato può essere valutato se si osserva un alto background in matrici complesse.
• Poiché la vinculina è una proteina ubiquitaria, includere controlli di caricamento appropriati (ad es. GAPDH, β-actina) è essenziale per le analisi quantitative.
• Per studi che coinvolgono tessuti muscolari, notare che l'anticorpo può riconoscere sia le isoforme di vinculina che di metavinculina; quest'ultima migra leggermente più in alto a circa 150 kDa.

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