Anticorpo policlonale Anti-WIPI1 di coniglio per WB, ELISA - Q5MNZ9

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di WIPI1

• Identità proteica e famiglia: WIPI1 (proteina 1 interagente con i fosfoinositidi a dominio ripetuto WD), indicata anche come omologo della proteina Atg18 o WIPI di 49 kDa, appartiene alla famiglia WIPI delle proteine a ripetizioni WD40 che interagiscono con i fosfoinositidi. Queste ripetizioni sono essenziali per il suo legame lipidico e le sue funzioni autofagiche.
• Funzione principale nell'autofagia: WIPI1 è un componente chiave del macchinario dell'autofagia, responsabile della formazione degli autofagosomi che trasportano il carico citoplasmatico ai lisosomi per la degradazione. Legge il fosfatidilinositolo 3-fosfato (PtdIns3P) e viene reclutato nel reticolo endoplasmatico per avviare l'assemblaggio del fagoforo (PubMed:15602573, PubMed:20114074, PubMed:20484055). Riferimenti correlati:
  • PMID:15602573
  • PMID:20114074
  • PMID:20484055
• Posizionamento nella via: Agendo a valle di ULK1 e PI3-chinasi, WIPI1 rileva il PtdIns3P generato sulle membrane del reticolo endoplasmatico. Aiuta quindi WIPI2 a reclutare il complesso ATG12-ATG5-ATG16L1, che guida direttamente l'allungamento della membrana autofagosomiale nascente. Questa funzione è fondamentale sia per l'autofagia indotta da fame e da calcio sia per la mitofagia (PubMed:28561066). Riferimenti correlati:
  • PMID:28561066
• Trasferimento lipidico e formazione di complessi: Insieme a WDR45/WIPI4, WIPI1 aumenta l'associazione delle proteine ATG2 (ATG2A o ATG2B) con le membrane ricche di PI3P, promuovendo quindi il trasferimento lipidico per l'espansione dell'autofagosoma (PubMed:31271352). Riferimenti correlati:
  • PMID:31271352
• Senofagia e difesa antimicrobica: WIPI1 partecipa all'autofagia selettiva dei patogeni, come Staphylococcus aureus, inglobando i batteri in vescicole simili ad autofagosomi positive a WIPI1 destinate alla distruzione lisosomiale (PubMed:22829830). Riferimenti correlati:
  • PMID:22829830
• Ruoli non autofagici: Oltre all'autofagia canonica, WIPI1 regola la maturazione dei melanosomi e la trascrizione degli enzimi melanogenici, un processo indipendente dalle vie indotte dalla fame (PubMed:21317285). Potrebbe essere anche coinvolta nel traffico del recettore del mannoso-6-fosfato (PubMed:15020712). Riferimenti correlati:
  • PMID:21317285
  • PMID:15020712
• Distribuzione tissutale e localizzazione subcellulare: WIPI1 è espressa ubiquitariamente, con livelli più alti nel muscolo scheletrico, cuore, testicolo, pancreas e placenta, ed è sovregolata in molte linee cellulari tumorali. Si localizza nella rete trans-Golgi, negli endosomi, nelle vescicole rivestite di clatrina e nelle strutture preautofagiche, oltre ad associarsi al citoscheletro.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Progettazione dell'immunogeno: L'immunogeno copre gli amminoacidi 187-446 della WIPI1 umana, una regione che contiene più ripetizioni WD40. Questa porzione centrale è conservata tra le specie, il che è coerente con la reattività incrociata osservata con topo e ratto.
• Western blotting (WB): Data l'elevata espressione di WIPI1 nel muscolo, cuore e testicolo, i lisati tissutali da queste fonti sono probabilmente controlli positivi adatti. Il peso molecolare previsto è ~49 kDa, ma possono apparire bande aggiuntive dovute a splicing alternativo o modifiche post-traduzionali. Si consiglia di includere una fase di bloccaggio e convalidare la specificità utilizzando controlli siRNA o knockout.
• Applicazione ELISA: Questo anticorpo può essere utilizzato in formati ELISA indiretti. Per lo sviluppo di ELISA sandwich, si consiglia di abbinarlo a un anticorpo di cattura monoclonale specifico per un epitopo non sovrapposto. Convalidare con la proteina WIPI1 ricombinante (come l'immunogeno) o lisati cellulari da cellule ad alta espressione.
• Reattività incrociata e coerenza tra specie: La reattività incrociata riportata con uomo, topo e ratto implica che gli epitopi riconosciuti sono conservati. Ciononostante, si raccomandano Western blot pilota con lisati di tutte e tre le specie per confermare la reattività e l'andamento delle bande.

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