Anticorpo Monoclonale Anti-WNK1 per WB - Q9H4A3

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Contesto biologico: Funzione e Localizzazione di WNK1

• WNK1 (Serina/treonina-protein chinasi WNK1) è la chinasi centrale della cascata WNK1-SPAK/OSR1, che rappresenta un regolatore critico della pressione sanguigna e del volume cellulare; promuove l'aumento del volume cellulare regolato percependo lo stress iperosmotico e attivando le vie di afflusso ionico. Riferimenti correlati: PMID:15883153, PMID:17190791, PMID:31656913
• In condizioni iperosmotiche, WNK1 funziona come sensore di affollamento molecolare, subendo la separazione di fase liquido-liquido per formare compartimenti senza membrana che concentrano WNK1 con i suoi substrati OXSR1/OSR1 e STK39/SPAK, potenziando la segnalazione della chinasi. Riferimenti correlati: PMID:36318922
• A valle, WNK1 fosforila e attiva OXSR1/OSR1 e STK39/SPAK, che a loro volta fosforilano i cotrasportatori ionici (SLC12A1/NKCC2, SLC12A2/NKCC1, SLC12A5/KCC2, SLC12A6/KCC3) per regolare il trasporto di sodio, potassio e cloruro, controllando quindi il volume cellulare e la pressione sanguigna. Riferimenti correlati: PMID:16263722, PMID:21321328, PMID:19665974
• Oltre al trasporto ionico, WNK1 regola l'angiogenesi tramite OXSR1/OSR1 e STK39/SPAK nelle cellule endoteliali, modula l'esportazione di mRNA fosforilando PCF11, regola negativamente l'autofagia ed è necessario per la fase di abscissione durante la mitosi. Riferimenti correlati: PMID:25362046, PMID:29196535, PMID:27911840, PMID:21220314
• WNK1 agisce anche come proteina scaffold indipendentemente dalla sua attività chinasi: stabilizza la componente EMC2 del complesso proteico della membrana del reticolo endoplasmatico e promuove l'attivazione di SGK1 reclutandolo in mTORC2 in modo cloro-dipendente. Riferimenti correlati: PMID:33964204, PMID:36373794
• Un'isoforma di WNK1 priva di attività chinasi, specifica per il rene, funziona come regolatore dominante-negativo della chinasi a lunghezza intera, svolgendo un ruolo chiave nell'equilibrio renale di sodio e potassio. Riferimenti correlati: PMID:14645531
• Subcellolarmente, WNK1 si localizza nel citoplasma, nel nucleo e nel fuso mitotico, in linea con i suoi ruoli nella segnalazione, nell'espressione genica e nella divisione cellulare.
• WNK1 è ampiamente espresso, con i livelli più alti nel testicolo, cuore, rene e muscolo scheletrico; si osserva una forte espressione anche nei gangli delle radici dorsali e nel midollo spinale. L'isoforma specifica per il rene è limitata al tubulo contorto distale e al tubulo connettore del nefrone.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico corrispondente agli amminoacidi 1-100 di WNK1 umano. Questa regione N-terminale potrebbe essere conservata; la reattività crociata con il topo è confermata. Validare l'anticorpo nel vostro sistema modello specifico.
• Per il Western blot, tenere conto dell'elevato peso molecolare (~251 kDa). Utilizzare un gel SDS-PAGE a bassa percentuale (es. 6-8%) e tempi di trasferimento prolungati (es., over night a 30 V) per garantire un trasferimento efficiente delle proteine ad alto peso molecolare.
• Per applicazioni ELISA, prendete in considerazione l'utilizzo del peptide immunogeno come controllo positivo per valutare il legame dell'anticorpo e definire le condizioni di saggio.

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