Anticorpo policlonale anti-WNK1 per WB, IF/ICC, ELISA - Q9H4A3

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di WNK1

• WNK1 è una chinasi proteina serina/treonina che funge da componente critico della cascata di chinasi WNK1-SPAK/OSR1, regolando la pressione sanguigna e l'omeostasi ionica. In condizioni di stress iperosmotico, agisce come sensore dell'affollamento molecolare, subendo una separazione di fase liquido-liquido per creare un compartimento privo di membrana che concentra WNK1 con i suoi substrati OXSR1/OSR1 e STK39/SPAK, promuovendo la loro fosforilazione e attivazione. Riferimenti correlati: PMID:15883153, PMID:17190791, PMID:31656913, PMID:36318922
• OXSR1/OSR1 e STK39/SPAK attivati fosforilano e attivano i cotrasportatori Na-K-Cl (SLC12A1/NKCC2, SLC12A2/NKCC1) inibendo contemporaneamente i cotrasportatori K-Cl (SLC12A5/KCC2, SLC12A6/KCC3), promuovendo così l'afflusso di ioni e l'aumento del volume regolatorio. Riferimenti correlati: PMID:16263722, PMID:21321328, PMID:19665974
• Oltre al trasporto ionico, WNK1 regola l'angiogenesi nelle cellule endoteliali attraverso l'attivazione della via SPAK/OSR1, contribuendo alla chemiotassi e alla proliferazione. Riferimenti correlati: PMID:25362046
• WNK1 fosforila substrati tra cui PCF11 (regolando l'esportazione nucleare dell'mRNA) e NEDD4L, e agisce come regolatore negativo dell'autofagia. Possiede anche funzioni di impalcatura indipendenti dalla chinasi, come la stabilizzazione del complesso proteico della membrana del RE e la regolazione di ENaC tramite l'attivazione di SGK1. Riferimenti correlati: PMID:29196535, PMID:27911840, PMID:33964204, PMID:36373794
• WNK1 è necessario per l'ablizione mitotica e può partecipare alla riorganizzazione del citoscheletro di actina. Riferimenti correlati: PMID:21220314, PMID:10660600
• Ampiamente espresso con i livelli più alti nel testicolo, cuore, rene e muscolo scheletrico; una isoforma specifica renale difettosa per la chinasi agisce come regolatore dominante-negativo della chinasi a lunghezza intera. A livello subcellulare, WNK1 si localizza nel citoplasma, nel nucleo e nel fuso mitotico.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende gli aminoacidi N-terminali 1-210 di WNK1 umano; questa regione non si sovrappone con il dominio della chinasi (residui 221–491), consentendo il rilevamento sia della forma a lunghezza intera che delle potenziali isoforme difettose per la chinasi.
• Per il Western blot, notare l'elevato peso molecolare previsto (~251 kDa); utilizzare un gel SDS-PAGE a bassa percentuale (es. 6%) e un trasferimento a umido con tempo prolungato per garantire un trasferimento efficiente.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica, WNK1 si localizza nel citoplasma, nel nucleo e nel fuso mitotico; la fissazione e la permeabilizzazione appropriate devono essere validate per il tipo di cellula specifico e il compartimento di interesse.
• Essendo un anticorpo policlonale, può verificarsi variabilità lotto-per-lotto; includere controlli positivi (es. HeLa, HEK293) e negativi in ogni esperimento per confermare la reattività.
• Per l'ELISA, considerare un formato a sandwich con un anticorpo di cattura validato se è necessario il rilevamento quantitativo.

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