Anticorpo policlonale anti-WNK1 coniglio per WB e ELISA - Q9H4A3

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di WNK1

• WNK1 (Proteina chinasi carente di lisina 1) è una serina/treonina-proteina chinasi che funge da regolatore principale della cascata chinasica WNK-SPAK/OSR1, controllando criticamente l'attività dei cotrasportatori ionici e la pressione sanguigna sistemica (PubMed:15883153, PubMed:17190791, PubMed:31656913).
  Riferimenti correlati: PMID:15883153, PMID:17190791, PMID:31656913
• Sotto stress iperosmotico, WNK1 agisce come sensore dell'affollamento molecolare, subendo una separazione di fase liquido-liquido per formare compartimenti privi di membrana che concentrano WNK1 con i suoi substrati OXSR1/OSR1 e STK39/SPAK, migliorando così la fosforilazione a valle e l'aumento del volume regolatorio (PubMed:36318922).
  Riferimenti correlati: PMID:36318922
• Oltre alla sua cascata chinasica canonica, WNK1 esercita funzioni dipendenti dalla chinasi nell'angiogenesi attivando OXSR1/OSR1 per la chemiotassi e STK39/SPAK per la proliferazione delle cellule endoteliali (PubMed:25362046), e fosforila ulteriori substrati come SYT2, PCF11 e NEDD4L per regolare rispettivamente il legame delle vescicole sinaptiche, l'esportazione di mRNA (PubMed:29196535) e la stabilità delle proteine di membrana.
  Riferimenti correlati: PMID:25362046, PMID:29196535
• Una isoforma specifica renale difettosa della chinasi agisce come regolatore dominante-negativo del WNK1 a lunghezza intera, modulando l'equilibrio di sodio e potassio nel nefrone distale, mentre le funzioni di impalcatura indipendenti dalla chinasi di WNK1 controllano la localizzazione di membrana di vari trasportatori e canali come SLC4A4, SLC26A6, TRPV4 e CFTR, e promuovono l'attivazione di SGK1 tramite il reclutamento di mTORC2 (PubMed:14645531, PubMed:36373794).
  Riferimenti correlati: PMID:14645531, PMID:36373794
• WNK1 è ampiamente espresso con i livelli più alti nei testicoli, cuore, rene e muscolo scheletrico, e mostra una presenza specifica nei gangli della radice dorsale e nei tubuli distali/connessi del rene, coerente con i suoi ruoli nella nocicezione e nell'omeostasi elettrolitica.
• A livello subcellulare, WNK1 si localizza nel citoplasma, nucleo e fuso mitotico, e partecipa alla riorganizzazione del citoscheletro di actina, all'ablazione mitotica e alla regolazione negativa dell'autofagia (PubMed:10660600, PubMed:21220314, PubMed:27911840).
  Riferimenti correlati: PMID:10660600, PMID:21220314, PMID:27911840
• Le modificazioni post-traduzionali includono fosforilazione, ubiquitinazione e glicosilazione; la proteina è anche sensibile al cloruro, con mutazioni legate alla neuropatia sensoriale e autonoma ereditaria di tipo II (HSAN2) e allo pseudoipoaldosteronismo.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale (aa 1-210) di WNK1 umano, che può riconoscere sia le isoforme a lunghezza intera che quelle specifiche renali—validare il rilevamento nei lisati cellulari o tissutali pertinenti.
• Per il Western blot, è prevista una banda vicino a 250 kDa; tuttavia, possono essere osservate più isoforme e potenziali prodotti di clivaggio. Considerare l'uso di inibitori delle proteasi freschi e condizioni di trasferimento ottimizzate per proteine ad alto peso molecolare.
• Le applicazioni ELISA possono beneficiare dell'uso della proteina ricombinante purificata o del peptide come controllo positivo per stabilire la sensibilità e la specificità dell'analisi.
• È stata riportata reattività crociata con topo e ratto; verificare la reattività nella specie di interesse con controlli appropriati (es. lisati knockout o peptide di blocco) ove possibile.
• Quando si studia la segnalazione dipendente dalla fosforilazione, notare che questo anticorpo policlonale non è fosforo-specifico; abbinarlo ad anticorpi fosforo-specifici per monitorare lo stato di attivazione di WNK1.

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