Anticorpo policlonale anti-WNK3 coniglio per WB, IF/ICC, ELISA - Q9BYP7

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del WNK3

• WNK3 (Proteina chinasi carente di lisina 3) è una serina/treonina-proteina chinasi codificata dal gene WNK3 (nota anche come KIAA1566, PRKWNK3), appartenente alla famiglia di chinasi WNK.
• È un componente chiave della cascata di chinasi WNK3-SPAK/OSR1 che regola l'omeostasi degli elettroliti e il recupero del volume cellulare durante lo stress iperosmotico. Riferimenti correlati: PMID:16275911, PMID:16275913, PMID:16501604
• A seguito della contrazione cellulare, il WNK3 agisce come sensore dell'affollamento molecolare e subisce una separazione di fase liquido-liquido per formare condensati senza membrana che concentrano i suoi substrati. Riferimenti correlati: PMID:36318922
• All'interno di questi condensati, il WNK3 fosforila e attiva le chinasi a valle OXSR1/OSR1 e STK39/SPAK, che a loro volta modulano i cotrasportatori ionici (NKCCs, NCC e KCCs) per controllare l'afflusso/efflusso di ioni. Riferimenti correlati: PMID:22989884, PMID:16275911, PMID:16275913, PMID:16357011
• Il WNK3 si localizza nel citoplasma e mostra un'espressione tessuto-specifica, con livelli elevati nel cervello, polmone, rene, fegato e pancreas, e isoforme distinte nel cervello (isoforma 1) e nel rene (isoforma 3).
• Oltre alla sua attività chinasica, il WNK3 funge da proteina impalciale che regola negativamente la localizzazione di membrana dei trasportatori come KCNJ1 e SLC26A9, e potenzia l'afflusso di calcio attraverso TRPV5/TRPV6. Riferimenti correlati: PMID:16357011, PMID:17673510, PMID:18768590

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 500–600 del WNK3 umano, fornendo una regione mirata per la generazione dell'anticorpo; considerare la verifica della specificità utilizzando controlli knockout o knockdown.
• Per il Western blotting, notare che il WNK3 ha un peso molecolare previsto di ~198 kDa; ottimizzare le condizioni di trasferimento per proteine ad alto peso molecolare (es. minore metanolo nel buffer di trasferimento, tempi di trasferimento più lunghi).
• Negli esperimenti di immunofluorescenza/ICC, validare i protocolli di fissazione e permeabilizzazione, poiché il WNK3 è una proteina citoplasmatica; includere controlli appropriati per confermare la localizzazione subcellulare.
• Per le applicazioni ELISA, valutare le prestazioni dell'anticorpo sia come reagente di cattura che di rilevamento; la reattività crociata con il WNK3 di mouse e ratto suggerisce epitopi conservati, ma verificare sempre nel contesto della specie pertinente.

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