Anticorpo policlonale di coniglio Anti-WRN per WB, ELISA - Q14191

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della WRN

• WRN codifica per un enzima multifunzionale con attività di DNA elicasi 3'–5' dipendente da magnesio e ATP su substrati parzialmente doppi, e attività di esonucleasi 3'–5' su dsDNA con sovrapposizione 5' (nessuna attività su ssDNA o dsDNA a estremità smussate). Riferimenti correlati: PMID:9224595, PMID:9288107, PMID:9611231, PMID:11863428
• La proteina lega e dispiega preferenzialmente strutture secondarie alternative del DNA come forcelle di replicazione, giunzioni di Holliday e DNA a G-quadruplex (es. ripetizioni d(CGG)n), facilitando la progressione della forcella di replicazione e prevenendo l'instabilità genomica. Riferimenti correlati: PMID:10212265
• WRN è fondamentale per la riparazione delle rotture doppie del DNA dopo irradiazione gamma e per la formazione di centri focali di replicazione del DNA; la sua deplezione porta a rotture cromosomiche e grave instabilità genomica. Riferimenti correlati: PMID:9224595, PMID:9288107, PMID:9611231, PMID:33199508
• La proteina si localizza prevalentemente nel nucleo, incluso il nucleolo, il nucleoplasma e le regioni cromosomiche, coerentemente con le sue funzioni nel metabolismo del DNA.
• WRN subisce molteplici modifiche post-traduzionali (acetilazione, fosforilazione, ubiquitinazione) che probabilmente regolano le sue attività di elicasi/esonucleasi e le interazioni proteina-proteina.
• Mutazioni nel gene WRN causano la sindrome di Werner, una malattia recessiva autosomica di invecchiamento precoce caratterizzata da instabilità genomica e predisposizione al cancro.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno (aa 1223–1432) si trova nella regione C-terminale al di fuori del dominio elicasi conservato, riducendo potenzialmente la reattività crociata con altri membri della famiglia RecQ.
• Per il Western blotting, è prevista una banda vicino a 162 kDa; utilizzare un marcatore ad alto peso molecolare e un gel a bassa percentuale (es. 6% SDS-PAGE) per una separazione ottimale.
• Validare la specificità dell'anticorpo in linee cellulari umane rilevanti (es. HeLa, HEK293) utilizzando un controllo di knockdown o un lisato positivo noto.
• Nell'ELISA, ottimizzare il rivestimento con l'immunogeno ricombinante o la proteina WRN a lunghezza intera e considerare un formato competitivo per una maggiore specificità.

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