Anticorpo policlonale anti-YTHDC1 per WB e ELISA - Q96MU7

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di YTHDC1

• YTHDC1 (YT521-B) è una proteina contenente il dominio YTH che funge da lettore delle modifiche N6-metiladenosina (m6A) sugli RNA e sui DNA a filamento singolo.
• Si lega specificamente agli mRNA contenenti m6A e regola lo splicing alternativo reclutando i fattori di splicing SRSF3 e SRSF10, influenzando così l'inclusione o il salto degli esoni.
  Riferimenti correlati: PMID:25242552 PMID:26318451 PMID:26876937
• YTHDC1 facilita anche l'esportazione nucleare degli mRNA modificati con m6A attraverso interazioni con SRSF3 e NXF1.
  Riferimenti correlati: PMID:28984244
• Nel nucleo, YTHDC1 si localizza negli speckles nucleari, che sono siti di elaborazione del pre-mRNA.
• Oltre allo splicing, è coinvolto nell'omeostasi dell'S-adenosil-L-metionina regolando l'espressione di MAT2A e nell'inattivazione del cromosoma X mediata da Xist.
  Riferimenti correlati: PMID:27602518 (per Xist)
• YTHDC1 si lega anche al DNA a filamento singolo contenente m6A, suggerendo ruoli più ampi nel riconoscimento degli acidi nucleici.
  Riferimenti correlati: PMID:32663306
• È essenziale per lo sviluppo della linea germinale, richiesto per lo sviluppo delle spermatogonie nei maschi e per la crescita degli ovociti nelle femmine, probabilmente attraverso le sue funzioni di splicing.
• Le modifiche post-traduzionali includono la fosforilazione, la formazione di legami isopeptidici e l'ubiquitinazione, come indicato dalle parole chiave di UniProt.
• Indipendentemente dalla sua attività di lettore m6A, YTHDC1 stabilizza PPARG impedendo la sua degradazione mediata dall'ubiquitina, contribuendo allo sviluppo del tessuto adiposo bruno.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 1–74 all'estremità N-terminale di YTHDC1 umano; questa regione può essere conservata tra le specie, supportando la reattività incrociata osservata con topo e ratto.
• Per il Western blot (WB), dovrebbe essere rilevata una banda corrispondente a circa 85 kDa (previsto). Si consiglia di utilizzare un gel SDS-PAGE all'8–10% per una risoluzione ottimale.
• A causa dello splicing alternativo, possono essere osservate multiple isoforme; validare la specificità utilizzando controlli appropriati o knockdown con siRNA nella linea cellulare rilevante.
• Per l'ELISA, può essere utilizzato il rivestimento diretto o indiretto con l'immunogeno ricombinante o lisati cellulari di origine umana, murina o di ratto. Si raccomanda la titolazione sia dell'antigene di rivestimento che dell'anticorpo.
• Utilizzare anticorpi secondari anti-coniglio standard e reagenti di rilevamento ottimizzati per il sistema di imaging o per il lettore di piastra.

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