Anticorpo monoclonale Anti-YTHDF2 (convalidato KO) per WB, IP, IF/ICC, ELISA - Q9Y5A9

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di YTHDF2

• YTHDF2 lega specificamente gli RNA contenenti N6-metiladenosina (m6A) e ne regola la stabilità promuovendone la degradazione tramite interazioni con il complesso deadenasico CCR4-NOT e il complesso ribonucleasi P/MRP. Riferimenti correlati: PMID:24284625 PMID:26046440 PMID:26318451 PMID:27558897
• I paraloghi YTHDF (YTHDF1, YTHDF2 e YTHDF3) condividono i target di mRNA contenenti m6A e agiscono in modo ridondante per mediare la degradazione dell'mRNA e la differenziazione cellulare. Riferimenti correlati: PMID:28106072 PMID:32492408
• Subcellularmente, YTHDF2 si localizza nel citosol, nei corpi P e nei granuli di stress, e può traslocare nel nucleo in determinate condizioni.
• YTHDF2 promuove la formazione di compartimenti senza membrana a separazione di fase, come i corpi P e i granuli di stress, subendo una separazione di fase liquido-liquido dopo il legame con mRNA contenenti più residui di m6A. Riferimenti correlati: PMID:31292544 PMID:31388144 PMID:31642031
• È necessario per la specificazione delle cellule staminali ematopoietiche, promuovendo la degradazione degli mRNA contenenti m6A. Riferimenti correlati: PMID:30065315
• YTHDF2 regola lo sviluppo neurale inibendo la specificazione neurale tramite la degradazione dipendente da m6A degli mRNA specifici neurali. Riferimenti correlati: PMID:32169943
• Regola la risposta immunitaria innata legando i trascritti IFNB contenenti m6A e promuovendone la degradazione, inibendo così la produzione di interferone di tipo I. Riferimenti correlati: PMID:30559377
• Durante l'infezione virale, YTHDF2 lega gli RNA virali modificati da m6A per promuovere l'espressione genica e la replicazione virale, come osservato per SV40 e l'herpesvirus associato al sarcoma di Kaposi (KSHV). Riferimenti correlati: PMID:29447282 PMID:29659627

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno (amminoacidi 339–565) comprende il dominio YTH fondamentale per il riconoscimento di m6A; per il Western blot, si consiglia di utilizzare linee cellulari knockout per confermare la specificità della banda, poiché questo anticorpo è già stato convalidato per KO.
• Per l'immunoprecipitazione (IP), l'anticorpo può essere adatto all'arricchimento di complessi endogeni YTHDF2-RNA; includere controlli negativi appropriati (ad esempio IgG) per valutare il segnale di fondo.
• In immunofluorescenza/ICC, YTHDF2 appare tipicamente in focali citoplasmatiche (corpi P e granuli di stress) e può shuttleare verso il nucleo; ottimizzare le condizioni di fissazione/permeabilizzazione in base al tipo di cellulare e al trattamento applicato (ad esempio granuli di stress indotti da arsenite).
• Per ELISA, possono essere utilizzati protocolli standard di ELISA indiretto con YTHDF2 ricombinante o lisati cellulari; convalidare sempre nella matrice di campione pertinente.

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