Anticorpo Monoclonale APC Anti-Umano TLR3 per Citometria a Flusso - O15455

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di TLR3

• Il recettore di tipo Toll 3 (TLR3), noto anche come CD283, IIAE2 e IMD83, è una proteina di membrana di tipo I a passaggio singolo che appartiene alla famiglia dei recettori di tipo Toll, caratterizzata da ripetizioni ricche di leucina (LRR) nel dominio extracellulare e da un dominio Toll/interleuchina-1 (TIR) nella coda citoplasmatica.
• TLR3 è un componente chiave sia dell'immunità innata che di quella adattativa, funzionando come un recettore di riconoscimento di pattern che rileva l'RNA a doppio filamento (dsRNA), un segno molecolare dell'infezione virale, innescando così risposte immunitarie antivirali.
• Dopo il legame con dsRNA negli endosomi, TLR3 segnala esclusivamente attraverso la proteina adattatrice TRIF (TICAM1), che attiva i fattori di trascrizione NF-kappa-B e IRF3, portando alla produzione di interferoni di tipo I e citochine proinfiammatorie.
• A livello subcellulare, TLR3 si localizza principalmente sulla membrana del reticolo endoplasmatico, sulla membrana dell'endosoma e negli endosomi precoci, posizionandolo per rilevare il dsRNA virale rilasciato durante l'acidificazione endosomiale.
• TLR3 è altamente espresso nella placenta e nel pancreas, ed è particolarmente presente nelle cellule dendritiche immature CD11c+; notevolmente, è il TLR espresso più fortemente nel cervello, in particolare negli astrociti, nella glia e nei neuroni.
• La proteina subisce modificazioni post-traduzionali inclusa glicosilazione, fosforilazione e coniugazione con ubiquitina, che ne regolano il traffico e l'attività di segnalazione.
• Lo splicing alternativo genera più isoforme, e mutazioni nel gene TLR3 sono associate a immunodeficienza e suscettibilità all'encefalite da herpes simplex.
• Con un peso molecolare di circa 104 kDa, TLR3 contiene più ponti disolfuro che stabilizzano il suo ectodominio a forma di solenoide LRR, essenziale per il riconoscimento del ligando.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione extracellulare N-terminale (amminoacidi 24–339), che comprende diversi moduli LRR; assicurarsi che l'anticorpo riconosca la conformazione nativa se utilizzato per la colorazione di superficie cellulare o endosomiale in condizioni non denaturanti.
• Per la citometria a flusso intracellulare (FC), è necessaria la permeabilizzazione; testare i protocolli di fissazione e permeabilizzazione (es. saponina o Triton X-100) per ottimizzare l'esposizione dell'epitopo preservando la stabilità del fluoroforo.
• L'espressione di TLR3 è prevalentemente intracellulare nelle cellule a riposo; la stimolazione con dsRNA o l'infezione virale possono aumentare e ridistribuire il recettore, quindi considerare controlli positivi appropriati come PBMC o cellule dendritiche trattate con poly(I:C).
• Non è riportata reattività crociata con altre specie; validare il rilevamento nella matrice di campione prevista, in particolare data l'elevata espressione di TLR3 nei tessuti placentari e cerebrali.
• Il coniugato APC fornisce un segnale brillante per la citometria a flusso; utilizzare controlli di compensazione appropriati ed evitare l'esposizione prolungata alla luce per prevenire lo sbiancamento fotochimico.

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