Anticorpo monoclonale APC Anti-LGR5 per Citofluorimetria - O75473

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di LGR5

• LGR5 (conosciuto anche come GPR49, GPR67 o HG38) è un recettore accoppiato a proteine G con ripetizioni ricche di leucina che funge da recettore per le R-spondine (RSPO1–RSPO4).
• Dopo il legame con le R-spondine, LGR5 potenzia la via di segnalazione canonica Wnt associandosi a LRP6 fosforilata e ai recettori frizzled, aumentando così l'espressione dei geni bersaglio di Wnt.
• A differenza dei classici recettori accoppiati a proteine G, LGR5 non attiva le proteine G eterotrimeriche per trasdurre i segnali.
• LGR5 è un marcatore di cellule staminali ben consolidato dell'epitelio intestinale e del follicolo pilifero, e svolge un ruolo fondamentale nello sviluppo e nel mantenimento delle cellule staminali intestinali adulte durante lo sviluppo postembrionico.
• Il recettore è localizzato principalmente sulla membrana cellulare, ed è stato rilevato anche nell'apparato di Golgi e nella membrana della rete trans-Golgi.
• L'espressione è presente nel muscolo scheletrico, placenta, midollo spinale e diverse regioni cerebrali; all'interno dell'intestino, marca le cellule staminali alla base delle cripte nell'epitelio mucoso del colon e dell'intestino tenue, e una sovraespressione è stata riportata in carcinomi ovarici, del colon e epatici.
• Le modifiche post-traduzionali comprendono la glicosilazione N-linked e la formazione di legami disolfuro. La proteina esiste in diverse isoforme a causa dello splicing alternativo.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno copre la regione amminoacidica 480–580 di LGR5 umano, una regione intracellulare. Il coniugato APC permette la rilevazione diretta mediante citofluorimetria senza bisogno di un anticorpo secondario.
• Per la citofluorimetria, si consiglia di testare sia il protocollo di colorazione superficiale su cellule vive sia il protocollo di colorazione intracellulare, poiché l'accessibilità dell'epitopo può variare; la permeabilizzazione potrebbe essere necessaria se l'epitopo bersaglio dell'anticorpo non è esposto sulla superficie extracellulare.
• LGR5 è espresso nelle popolazioni di cellule staminali; per un'identificazione accurata delle cellule LGR5+, si raccomanda una corretta dissociazione del tessuto in sospensione di singole cellule e l'identificazione per gating delle cellule vitali.
• Convalidare l'anticorpo nel sistema sperimentale di interesse (ad esempio organoidi intestinali umani, linee cellulari cancerose o tessuto primario) utilizzando controlli appropriati.

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