Anticorpo Monoclonale APC Coniugato, Coniglio anti-Umano NT5E/CD73 per Citometria a Flusso - P21589

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di NT5E/CD73

• Attività enzimatica principale: NT5E/CD73 è una 5'-nucleotidasi che idrolizza i nucleosidi monofosfati extracellulari in nucleosidi e fosfato inorganico, con una forte preferenza per l'AMP rispetto ad altri substrati. Questo passaggio è limitante nella generazione di adenosina immunosoppressiva a partire dall'ATP.
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• Specificità del substrato: Oltre all'AMP, l'enzima può agire anche su IMP, UMP, GMP, CMP e diversi desossinucleotidi (dAMP, dCMP, dTMP), così come su NAD e NMN, sebbene i monofosfati di ribonucleotide siano i substrati preferiti.
• Localizzazione subcellulare: CD73 è ancorato al foglietto esterno della membrana plasmatica tramite un'ancora glicosilfosfatidilinositolo (GPI) C-terminale, posizionando il suo sito attivo nello spazio extracellulare per regolare i pool nucleotidici pericellulari.
• Modificazioni post-traduzionali: La proteina è N-glicosilata e contiene ponti disolfuro strutturalmente importanti. Il suo ancoraggio alla membrana dipende interamente dall'ancora GPI.
• Caratteristiche strutturali: Appartiene alla famiglia delle 5'-nucleotidasi e richiede zinco e altri ioni metallici divalenti per l'attività catalitica. La molecola esiste come omodimero sulla superficie cellulare.
• Rilevanza nelle malattie: Mutazioni in NT5E sono associate alla calcificazione arteriosa da deficit di CD73 (ACDC), una rara malattia genetica, e la proteina è un importante bersaglio di checkpoint immunitario in oncologia.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno copre l'intero dominio extracellulare (amminoacidi 27–547), che include le regioni catalitica e di legame del substrato. Questo design favorisce il riconoscimento di CD73 nativo e correttamente ripiegato su cellule vive.
• Per la citometria a flusso, considerare di titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione ottimale di colorazione per il tipo cellulare di interesse. Includere appropriati controlli isotipo e coloranti di vitalità.
• CD73 viene rilasciato o secreto su vescicole extracellulari in alcuni sistemi; assicurarsi che la preparazione del campione minimizzi il danno cellulare per evitare segnali falsi negativi.
• Questo coniugato APC è ben adatto per pannelli multiplex; verificare le impostazioni di compensazione quando combinato con altri fluorofori.

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