Anticorpo monoclonale APC coniglio anti-uomo/scimmia Ki67 per citometria a flusso intracellulare - P46013

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di Ki67

• Ki-67 agisce come repellente cromosomico durante la mitosi precoce, prevenendo il collasso cromosomico formando una barriera di carica sterica ed elettrostatica sulla superficie del cromosoma. Riferimenti correlati: PMID:27362226
• Durante l'anafase mitotica, Ki-67 passa a un ruolo di attrattore cromosomico, promuovendo l'aggregazione dei cromosomi ed escludendo le particelle citoplasmatiche dal futuro spazio nucleare. Riferimenti correlati: PMID:32879492 PMID:39153474
• La defosforilazione durante l'uscita dalla mitosi e l'esposizione di un patch basico conservato inducono la separazione di fase liquida-liquida dipendente dall'RNA, che coalesce le superfici cromosomiche. Riferimenti correlati: PMID:39153474 PMID:28935370
• Ki-67 si lega al DNA, con una preferenza per il DNA superavvolto e ricco di AT. Riferimenti correlati: PMID:10878551
• La localizzazione subcellulare comprende le superfici cromosomiche, i nucleoli e il nucleo, in linea con il suo ruolo dinamico durante il ciclo cellulare.
• La proteina subisce molteplici modifiche post-traduzionali tra cui fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione, che probabilmente regolano la sua attività e localizzazione.
• Ki-67 può influenzare l'organizzazione della cromatina di ordine superiore, anche se il suo ruolo diretto rimane in fase di studio. Riferimenti correlati: PMID:24867636
• Lo splicing alternativo genera più isoforme di Ki-67, che possono modulare la sua funzione in diversi contesti cellulari.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico corrispondente agli amminoacidi 2271–2370 vicino all'estremità C-terminale; l'anticorpo può riconoscere sia la forma full-length che le isoforme splicing rilevanti che contengono questo epitopo.
• Per la citometria a flusso intracellulare, ottimizzare i passaggi di fissazione e permeabilizzazione per garantire l'accessibilità all'antigene Ki67 nucleare.
• Utilizzare un controllo di isotipo appropriato e convalidare in una linea cellulare proliferante (ad esempio HeLa) con un controllo negativo di cellule a riposo per confermare la specificità.
• A causa delle grandi dimensioni della proteina (359 kDa), considerare di acquisire un numero sufficiente di eventi e utilizzare impostazioni appropriate di compensazione della fluorescenza.

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