Anticorpo monoclonale di coniglio anti-H-2Kd/H-2Dd di topo coniugato con APC per citometria a flusso - P01902/P01900

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di H-2Kd/H-2Dd

• H-2K1 codifica la catena pesante H-2Kd, una molecola MHC di classe I classica che presenta antigeni peptidici endogeni alle cellule T CD8+, avviando le risposte immunitarie adattative.
• L'antigene H-2Dd (codificato da H2-D1) è un'altra molecola MHC di classe I classica con struttura e funzione simili, entrambe fondamentali nella sorveglianza immunitaria e nel rigetto dei trapianti.
• Queste glicoproteine legate alla membrana sono costituite da un peptide segnale, tre domini extracellulari (α1–α3), un'elica transmembrana e una breve coda citoplasmatica; formano eterodimeri con la beta-2-microglobulina.
• I complessi MHC di classe I caricati con peptidi vengono trasportati sulla superficie cellulare per essere esaminati dai recettori delle cellule T, consentendo il rilevamento di patogeni intracellulari o antigeni tumorali.
• Le modifiche post-traduzionali includono la glicosilazione legata all'azoto, la formazione di ponti disolfuro e la fosforilazione, fondamentali per il corretto ripiegamento, la stabilità e il riconoscimento immunitario.
• Espresse costitutivamente su tutte le cellule nucleate, con livelli elevati nei tessuti linfoidi; l'espressione è sovraregolata da citochine infiammatorie come gli interferoni.
• Il peso molecolare della proteina precursore non processata è di circa 41,5 kDa (UniProt: 41490 Da), mentre la forma matura glicosilata migra intorno a 41 kDa.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno (aa 26–301) copre la regione extracellulare, suggerendo che l'anticorpo riconosca la molecola MHC I nativa espressa sulla superficie senza permeabilizzazione.
• Per la citometria a flusso, titolare l'anticorpo sul tipo cellulare di interesse per determinare la concentrazione di colorazione ottimale; la diluizione iniziale tipica varia da 1:50 a 1:200.
• Includere controlli isotipici, coloranti per la vitalità e il blocco dei recettori Fc (ad es. anti-CD16/CD32) per ridurre al minimo il legame aspecifico e identificare accuratamente le cellule vive.
• La coniugazione con APC è brillante e fotostabile; assicurarsi di utilizzare controlli di compensazione appropriati nella progettazione di pannelli multicolore per evitare sovrapposizioni spettrali.
• Verificare la reattività con il ceppo di topo in uso: l'anticorpo reagisce con gli apl tipi H-2Kd/H-2Dd (ad es. BALB/c, DBA/2); gli alleli di altri apl tipi possono mostrare un legame ridotto o assente.

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