APC Coniugato con Anticorpo Monoclonale di Coniglio anti-TNF-α di Topo per FC (intra) - P06804

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione del TNF-α

• Il fattore di necrosi tumorale (TNF-α) è una citochina pro-infiammatoria secreta principalmente da macrofagi attivati, appartenente alla superfamiglia dei ligandi del fattore di necrosi tumorale (TNFSF2). È anche conosciuto come cachectina ed è codificato dal gene Tnf (nomi alternativi Tnfa, Tnfsf2).
• Il TNF-α esercita i suoi effetti biologici legandosi a due recettori distinti, TNFR1 (TNFRSF1A) e TNFR2 (TNFRSF1B), mediando una vasta gamma di risposte cellulari tra cui apoptosi, sopravvivenza cellulare e infiammazione.
• Questa citochina è un mediatore chiave della risposta di fase acuta e può funzionare come un pirogeno endogeno, inducendo febbre direttamente o attraverso la stimolazione della secrezione di interleuchina-1, ed è implicata nello sviluppo della cachessia in stati di malattia cronica.
• Nel tessuto adiposo, il TNF-α induce resistenza all'insulina inibendo la fosforilazione tirosinica di IRS1 indotta dall'insulina e l'assorbimento del glucosio, e promuove la degradazione della proteina GKAP42, contribuendo alla patogenesi del diabete di tipo 2. Riferimenti correlati: PMID:25586176
• Il TNF-α svolge un ruolo significativo nel metabolismo osseo promuovendo l'osteoclastogenesi e quindi mediando il riassorbimento osseo, collegando l'infiammazione alla perdita ossea in condizioni come l'artrite reumatoide. Riferimenti correlati: PMID:32741026
• Il dominio intracellulare (ICD) del TNF-α, generato da scissione proteolitica, può agire come una molecola di segnalazione per indurre la produzione di IL-12 nelle cellule dendritiche, evidenziando una funzione indipendente dal recettore.
• A livello subcellulare, il TNF-α è sintetizzato come una proteina transmembrana di tipo II (26 kDa) sulla membrana cellulare, ed è scisso dall'enzima convertitore del TNF-α (TACE) per rilasciare la citochina solubile di 17 kDa. La proteina subisce diverse modificazioni post-traduzionali tra cui glicosilazione, fosforilazione, miristoilazione e formazione di legami disolfuro.
• Oltre ai suoi ruoli citotossici e infiammatori, il TNF-α stimola anche l'angiogenesi in sinergia con IL-1β e IL-6, e in determinate condizioni può promuovere la proliferazione e la differenziazione cellulare, riflettendo la sua natura pleiotropica.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 80-235 del TNF-α di topo (NP_038721.1), coprendo la regione del TNF-α solubile maturo. Questo design è mirato al dominio extracellulare, potenzialmente riconoscendo sia le forme legate alla membrana che quelle solubili.
• Per la citometria a flusso intracellulare, i protocolli di fissazione e permeabilizzazione sono critici. Si consiglia di utilizzare un protocollo standard di colorazione intracellulare con un kit di fissazione/permeabilizzazione adatto per citochine.
• Poiché il TNF-α è una proteina secreta, le cellule a riposo possono avere bassi livelli intracellulari. Per un rilevamento robusto, stimolare le cellule (ad esempio con PMA/ionomicina o LPS) in presenza di un inibitore del trasporto proteico (ad esempio Brefeldina A o Monensin) per accumulare il TNF-α nell'apparato di Golgi.
• Si raccomanda di titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione ottimale per il proprio sistema sperimentale specifico, partendo da un intervallo di 0,5-5 µg per milione di cellule.
• Eseguire controlli appropriati inclusi cellule non stimolate e anticorpi di controllo isotipico per differenziare la colorazione specifica dal fondo.
• L'anticorpo è coniugato con APC, un fluoroforo brillante adatto per pannelli di citometria a flusso multicolore. Assicurarsi una corretta compensazione quando utilizzato con altri fluorofori.

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