Anticorpo monoclonale anti-HLA-DRA APC/Cianina7 per citometria a flusso - P01903

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di HLA-DRA

• Il gene HLA-DRA codifica la catena alfa della molecola MHC di classe II HLA-DR, che si associa alla catena beta (HLA-DRB) per formare eterodimeri funzionali sulle cellule presentanti l'antigene. Questo complesso presenta antigeni peptidici alle cellule T CD4+, coordinando le funzioni effettrici dei linfociti T helper, le risposte anticorpali e l'attivazione dei macrofagi (PubMed:15265931, PubMed:15322540, PubMed:17334368). Riferimenti correlati: PMID:15265931 PMID:15322540 PMID:17334368
• Presenta tipicamente peptidi extracellulari di 10–30 amminoacidi derivati da antigeni endocitati e processati nei lisosomi, con un residuo di ancoraggio idrofobico in posizione 1 fondamentale per il legame (PubMed:8145819). Riferimenti correlati: PMID:8145819
• Nel microambiente tumorale, HLA-DR presenta peptidi derivati da cellule tumorali apoptotiche o da proteine tumorali secrete e captate dalle APC, influenzando l'immunità antitumorale (PubMed:31495665). Riferimenti correlati: PMID:31495665
• Inoltre, HLA-DR presenta peptidi derivati da proteine intracellulari tramite macroautofagia, un processo essenziale per la selezione timica delle cellule T e il mantenimento della tolleranza immunitaria centrale (PubMed:17182262, PubMed:23783831). Riferimenti correlati: PMID:17182262 PMID:23783831
• La localizzazione subcellulare comprende la membrana cellulare, le membrane endosomiali/lisosomiali e gli autofagolisosomi, riflettendo il suo ruolo dinamico nel processamento e nella presentazione degli antigeni.
• È espresso sulle cellule professionali presentanti l'antigene (macrofagi, cellule dendritiche, cellule B) e sulle cellule epiteliali timiche (a livello proteico) (PubMed:15322540, PubMed:23783831, PubMed:31495665). Riferimenti correlati: PMID:15322540 PMID:23783831 PMID:31495665
• La proteina presenta una sequenza segnale N-terminale, un'unica elica transmembrana e due legami disolfuro nel dominio extracellulare; è soggetta a glicosilazione N-linked e può essere ubiquitinata.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Questo anticorpo monoclonale coniugato con APC/Cianina7 è stato generato contro HLA-DR umano ricombinante; è probabile che riconosca un epitopo conformazionale. Per la citometria a flusso, utilizzare protocolli standard di colorazione della superficie su cellule vive, mantenendo anticorpi e cellule al freddo per prevenire l'internalizzazione dell'antigene.
• Considerata la reattività crociata conservata con la scimmia cynomolgus, si consiglia di eseguire esperimenti di titolazione sia per i campioni umani sia per quelli di primati non umani (NHP), al fine di determinare la concentrazione di lavoro ottimale.
• Per ridurre al minimo il legame aspecifico nei campioni ricchi di cellule mieloidi, includere una fase di blocco dei recettori Fc (ad esempio, human TruStain FcX o prodotto simile) e controlli isotipici appropriati.
• La banda a 29 kDa (catena HLA-DRA) viene spesso rilevata come parte dell'eterodimero MHCII α/β sulla superficie cellulare; in condizioni riducenti, la catena alfa può migrare a un peso molecolare apparente leggermente superiore a causa della glicosilazione.
• Per la colorazione intracellulare è necessaria una fissazione/permeabilizzazione delicata; validare il protocollo nel proprio sistema di campioni, poiché l'epitopo potrebbe essere sensibile ai trattamenti aggressivi.

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