Anticorpo monoclonale coniugato APC/Cyanine7 anti-CD45 di topo da coniglio per citometria a flusso - P06800

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CD45

• La tirosina-proteina fosfatasi di tipo recettoriale C (CD45), codificata dal gene PTPRC, è una fosfatasi transmembrana essenziale per la trasduzione del segnale nelle cellule immunitarie. Lo splicing alternativo genera più isoforme (ad esempio CD45R, B220) con domini extracellulari distinti.
• CD45 è richiesta per l'attivazione dei linfociti T attraverso il recettore dell'antigene, agendo come regolatore positivo dopo il legame con DPP4. Modula la soglia di segnalazione del recettore dei linfociti T.
• La regione intracellulare contiene due domini di proteina tirosina fosfatasi (PTP); il primo possiede attività catalitica, mentre il secondo influisce sulla specificità e l'attività per il substrato.
• CD45 defosforila le chinasi della famiglia Src come LYN, FYN e LCK, regolando di conseguenza le loro attività chinasi e le cascate di segnalazione a valle nei linfociti.
• L'interazione con CLEC10A sulle cellule presentanti l'antigene (ad esempio cellule dendritiche immature) regola finemente l'attivazione dei linfociti T, contribuendo al mantenimento dell'autotolleranza.
• CD45 è localizzato sulla membrana cellulare ed è arricchito nelle zolle di membrana e nella sinapsi immunologica, posizione che gli permette di integrare i segnali recettoriali.
• Le modifiche post-traduzionali includono un'estesa glicosilazione legata a N e O, che influenza l'espressione delle isoforme e le interazioni proteina-proteina.
• Conosciuto come antigeno comune dei leucociti (L-CA) e Ly-5, CD45 è espresso ampiamente su tutte le cellule ematopoietiche nucleate, con pattern specifici per isoforma che distinguono i sottogruppi di leucociti.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno copre gli amminoacidi 26–566 del CD45 di topo, coprendo gran parte del dominio extracellulare. Questo design permette probabilmente di riconoscere più isoforme di CD45, ma gli utenti devono verificare la specificità per l'isoforma nel proprio sistema sperimentale.
• Per la citometria a flusso, titolare l'anticorpo coniugato APC/Cyanine7 su leucociti di topo per determinare la concentrazione di colorazione ottimale, e includere controlli appropriati di isotipo e di controllo senza fluorescenza (FMO, Fluorescence-Minus-One).
• APC/Cyanine7 emette nel canale del rosso estremo (~780 nm), permettendo una chiara separazione da fluorofori comuni come FITC, PE e APC. Utilizzare una linea laser compatibile (ad esempio eccitazione a 633 nm) e set di filtri appropriati.
• A causa dell'elevata espressione di CD45 sui leucociti, evitare una sovracolorazione che può causare legame non specifico; una tipica diluizione di partenza di 0,25–1,0 µg per milione di cellule in citometria a flusso è un punto di riferimento ragionevole.
• Per la progettazione di pannelli, considerare CD45 come marcatore pan-leucocitario per selezionare le cellule immunitarie vive, quindi combinare con anticorpi specifici per lignaggio (ad esempio CD3, CD19) per l'immunofenotipizzazione.

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