Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CD8a umano/scimmia APC/Cyanine7 per citometria a flusso - P01732

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di CD8a

• La catena alfa della glicoproteina di superficie dei linfociti T CD8 (CD8A) è una glicoproteina integrale di membrana che funge da co-recettore per le molecole MHC di classe I. Interagisce con il recettore dei linfociti T (TCR) e con l'MHC I sulle cellule presentanti l'antigene, reclutando la chinasi Src LCK per attivare vie di segnalazione intracellulari essenziali per l'attivazione dei linfociti T e le risposte citotossiche.
• CD8A può esistere come eterodimero legato da ponti disolfuro con CD8B oppure come omodimero. Gli eterodimeri sono tipici dei linfociti T derivati dal timo, mentre gli omodimeri sono espressi sulle cellule NK, sui linfociti T della memoria, sui linfociti intraepiteliali, sui monociti e sulle cellule dendritiche.
• Questo meccanismo di co-recettore consente ai linfociti T citotossici (CTL) di riconoscere ed eliminare le cellule infette o tumorali, svolgendo un ruolo fondamentale nell'immunità adattativa contro minacce esterne e interne.
• Nelle cellule NK, gli omodimeri CD8A favoriscono la sopravvivenza e facilitano la coniugazione con molteplici cellule target, potenziando la lisi seriale.
• CD8A è espresso su una sottopopolazione di cellule natural killer, linfociti T della memoria e cellule dendritiche plasmacitoidi; queste ultime lo esprimono in seguito a stimolazione virale, ad esempio da parte del virus herpes simplex-1, evidenziandone il ruolo nella difesa immunitaria precoce.
• La proteina è sottoposta a modifiche post-traduzionali, tra cui la formazione di ponti disolfuro, la glicosilazione e la palmitoilazione, che sono fondamentali per la localizzazione e la funzione nella membrana. Lo splicing alternativo produce isoforme sia legate alla membrana sia secrete.
• La localizzazione subcellulare comprende la membrana cellulare e la secrezione extracellulare; un peptide segnale dirige la sua sintesi nella via secretoria.

Linee guida sperimentali e suggerimenti tecnici

• Per la citometria a flusso, una diluizione iniziale tipica compresa tra 1:50 e 1:200 è spesso efficace; eseguire una titolazione sul tipo cellulare di interesse per determinare la concentrazione ottimale.
• Utilizzare controlli di compensazione appropriati e proteggere l'anticorpo coniugato dall'esposizione prolungata alla luce per mantenere la stabilità del fluoroforo.
• Colorare le cellule vive in un tampone di colorazione ghiacciato senza permeabilizzazione, poiché CD8a è un antigene della superficie cellulare.
• Includere un controllo isotipico o la colorazione con un marcatore congenico per un gating accurato delle popolazioni CD8+, soprattutto durante l'analisi delle sottopopolazioni di linfociti T o delle cellule NK.
• Questo anticorpo è stato validato per riconoscere il CD8a umano e quello del macaco cinomolgo. Gli utenti che lavorano con specie diverse devono confermare la reattività nel proprio sistema sperimentale specifico.

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