Anticorpo policlonale di coniglio ASC/TMS1 per WB, IF, IHC-P, ELISA - Q9ULZ3

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di ASC/TMS1

• ASC/TMS1 (proteina simile a uno speck associata all'apoptosi contenente un CARD), nota anche come PYCARD, CARD5 o TMS-1, è una proteina adattatrice di 22 kDa costituita da un dominio pirinico N-terminale (PYD) e da un dominio di reclutamento della caspasi C-terminale (CARD).
• Agisce come piattaforma centrale dell'inflammasoma, collegando i sensori NLR (NLRP1, NLRP3, NLRC4) o AIM2 alla procaspasi-1, determinando così l'attivazione della caspasi-1, la maturazione di IL-1β e IL-18 e la morte cellulare piroptotica. Riferimenti correlati: PMID:15030775, PMID:16982856, PMID:17349957, PMID:24630722
• ASC media l'apoptosi promuovendo la scissione di BID dipendente dalla caspasi-8, la traslocazione mitocondriale di BAX e la successiva attivazione delle caspasi-9 e -3, spesso indipendentemente da FADD. Riferimenti correlati: PMID:11103777, PMID:12646168, PMID:14730312, PMID:16964285
• Nel nucleo, ASC può modulare la segnalazione di NF-κB inibendo il complesso IKK e competendo con RIPK2, regolando così finemente l'espressione dei geni infiammatori. Riferimenti correlati: PMID:12486103, PMID:16585594
• ASC si localizza in molteplici compartimenti subcellulari, tra cui citoplasma, speck dell'inflammasoma, reticolo endoplasmatico, mitocondri, nucleo e apparato di Golgi, in linea con i suoi molteplici ruoli nella segnalazione immunitaria e nell'apoptosi.
• È ampiamente espressa a bassi livelli, con una maggiore abbondanza nei leucociti del sangue periferico, nei polmoni, nell'intestino tenue, nella milza, nel timo e nel colon. Nei tumori, l'espressione è spesso silenziata dalla metilazione del promotore, in accordo con la sua attività di soppressore tumorale riportata. Riferimenti correlati: PMID:23229815
• ASC è soggetta a modificazioni post-traduzionali regolatorie, tra cui ubiquitinazione e fosforilazione, che controllano l'assemblaggio dell'inflammasoma e l'intensità del segnale.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende la regione centrale (aa 50–195) che collega i domini PYD e CARD, il che può conferire reattività sia contro ASC a lunghezza intera sia contro le varianti di splicing; si consiglia di convalidare la specificità mediante controlli di knockdown o knockout.
• Nel Western blot è prevista una banda predominante intorno a 22 kDa; utilizzare lisati di controllo positivi di cellule THP‑1 o di cellule mononucleate del sangue periferico umano e includere inibitori delle proteasi per ridurre al minimo la degradazione.
• Per l'immunofluorescenza e l'ICC, gli aggregati simili a speck sono una caratteristica distintiva degli inflammasomi attivati; la co-colorazione con anticorpi contro NLRP3, AIM2 o caspasi-1 può confermare la formazione dell'inflammasoma. Le condizioni di fissazione e permeabilizzazione devono essere ottimizzate in base al tipo cellulare e allo stato di attivazione.
• Nell'IHC-P (tessuti inclusi in paraffina), si raccomanda il recupero antigenico in tampone citrato (pH 6,0) e il blocco delle perossidasi endogene; i tessuti con infiammazione nota (ad es. colon infiammato, tonsilla) sono controlli positivi appropriati.
• Per le applicazioni ELISA, l'abbinamento di questo anticorpo policlonale con un anticorpo monoclonale di cattura può migliorare il segnale; convalidare la linearità e la specificità del test utilizzando proteina ASC ricombinante.
• Questo anticorpo rileva ASC umano, murino e di ratto; tuttavia, la reattività crociata può variare in base al formato del test, pertanto si consiglia di includere una convalida specifica per specie.

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