Anticorpo policlonale coniglio Asymmetric DiMethyl-Histone H3-R8 (Q16695 / P68431) – Validato per WB, IHC-P, ChIP, ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H3 (Asymmetric Dimethyl-R8)

L'istone H3 è un componente principale del nucleosoma, che avvolge e compatta il DNA nella cromatina, limitando l'accessibilità del DNA ai macchinari cellulari. Le istone svolgono un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. L'accessibilità del DNA è regolata dinamicamente attraverso un complesso insieme di modificazioni post-traduzionali (PTM), collettivamente note come codice delle istone, e tramite il rimodellamento dei nucleosomi. Riferimenti correlati: UniProt Q16695, UniProt P68431

Tra le numerose PTM sull'istone H3, la metilazione dell'arginina è catalizzata dalle protein arginine methyltransferases (PRMT) e può avvenire in forme asimmetriche o simmetriche. La dimetilazione asimmetrica di H3R2 è mediata da PRMT6 PMID:17898714, mentre la dimetilazione asimmetrica di H3R17 è catalizzata da CARM1 PMID:15345777. Si sa che il residuo H3R8 è simmetricamente dimetilato da PRMT5; tuttavia, anche il dimetil-asimmetrico-H3R8 è stato riportato come un marcatore epigenetico specifico. Questo anticorpo si rivolge allo stato di dimetilazione asimmetrica a R8, consentendo la discriminazione di questa modifica.

L'istone H3 è localizzato nel nucleo e nella cromatina. L'isoforma canonica H3.1 (P68431) è espressa ubiquitariamente, mentre la variante H3.1t (Q16695) è espressa specificamente nelle cellule testicolari. Riferimenti correlati: PMID:16567635 (citrullinazione a R8/R2/R17)

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico che presenta dimetilazione asimmetrica a R8; si prevede che l'anticorpo riconosca specificamente questa modifica. Tuttavia, a causa dell'omologia di sequenza, può verificarsi reattività crociata con altre varianti o siti dell'istone H3 metilati. Validare la specificità utilizzando la competizione peptidica, knockout/knockdown o mutagenesi site-directed.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto è di circa 15 kDa. Le istone sono altamente basiche; utilizzare gel acido-urea o includere controlli appropriati per risolvere le forme modificate.
• Per ChIP, considerare che il dimetil-asimmetrico-H3R8 può marcare stati cromatinici specifici; ottimizzare le condizioni di crosslinking e di shearing.
• Le applicazioni elencate includono WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA e ChIP. Le diluizioni devono essere determinate empiricamente e tutti gli saggi devono includere controlli negativi e positivi appropriati.
• La reattività crociata è prevista contro umano, topo, ratto e altre specie a causa dell'alta conservazione dell'istone H3. Verificare nel sistema di campione pertinente.

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