Anticorpo Monoclonale Coniglio anti-Mouse CD45 Biotinilato per Citometria a Flusso - P06800

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di CD45 (PTPRC)

• CD45 (fosfatasi proteica tirosinica di tipo recettoriale C) è un antigene comune leucocitario (L-CA) espresso ubiquitariamente, noto anche come Ly-5 e T200. Lo splicing alternativo genera multiple isoforme, tra cui B220 (CD45R) presente prevalentemente sui linfociti B.
• Contiene due domini intracellulari di fosfatasi proteica tirosinica (PTP); il primo dominio possiede attività enzimatica, mentre il secondo modula la specificità del substrato.
• CD45 è essenziale per l'attivazione delle cellule T tramite il recettore dell'antigene, fungendo da regolatore positivo della co-attivazione upon binding a DPP4.
• Upon attivazione delle cellule T, CD45 recluta e defosforila SKAP1 e FYN, e defosforila anche LYN per modulare la sua attività chinasica.
• Alle interfacce tra cellule presentanti l'antigene e cellule T, CD45 interagisce con CLEC10A sulle cellule dendritiche immature, che riconosce il CD45 modificato con antigene Tn sulle cellule T effetrici, regolando la soglia di attivazione per limitare l'autoimmunità.
• Si localizza alla membrana cellulare, ai raft di membrana e alla sinapsi immunologica, in accordo con il suo ruolo nella trasduzione del segnale.
• Le modifiche post-traduzionali includono una pesante glicosilazione N-legata e la fosforilazione sui residui serina/treonina.
• CD45 è un membro della famiglia delle fosfatasi proteiche tirosiniche e appartiene alla classe I delle PTP di tipo recettoriale.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Per la citometria a flusso, titolare l'anticorpo biotinilato su una gamma di concentrazioni (es. 0,1–5 µg/test) per determinare l'indice di colorazione ottimale con il modello cellulare specifico e il coniugato secondario di streptavidina.
• Includere una colorazione di controllo isotipo appropriata per valutare il legame di fondo, specialmente quando si utilizzano sistemi di rilevamento amplificati come streptavidina-PE o streptavidina-APC.
• Prima dell'uso, validare l'anticorpo nella rilevante popolazione di leucociti murini (es. splenociti, cellule dei linfonodi o cellule mononucleate del sangue periferico) per confermare l'espressione e la risoluzione attese.
• La coniugazione con biotina offre flessibilità; considerare l'uso di coniugati di streptavidina abbinati ai laser e filtri del proprio strumento per pannelli a colore singolo o multicolore.
• Per il rilevamento indiretto, assicurarsi di adeguate fasi di lavaggio dopo l'incubazione primaria per ridurre l'anticorpo non legato e minimizzare il segnale non specifico.

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