CAST Rabbit pAb per WB, ELISA - P20810

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della Calpastatina

• La calpastatina (CAST) è uno specifico inibitore endogeno della calpaina, una famiglia di proteasi cisteiniche dipendenti dal calcio (EC 3.4.22.-) coinvolte nel rimodellamento del citoscheletro, nella trasduzione del segnale e nell'apoptosi.
• Legandosi strettamente e inibendo la calpaina, la calpastatina regola l'attività delle proteasi nel tessuto muscolare, svolgendo un ruolo critico nell'ammorbidimento della carne post-mortem e possibilmente nel controllo della degradazione delle proteine muscolari nelle cellule viventi.
• Il gene CAST subisce un ampio splicing alternativo, generando multiple isoforme con distribuzioni tissutali distinte e capacità inibitorie.
• La calpastatina contiene quattro domini inibitori ripetitivi (domini L), ciascuno capace di inibire indipendentemente la calpaina, insieme a un dominio N-terminale L e una coda C-terminale; questa architettura multipla è alla base della sua potente e cooperativa inibizione delle proteasi.
• Le modifiche post-traduzionali includono acetilazione, fosforilazione, ubiquitinazione e formazione di legami isopeptidici, che possono modulare la stabilità, la localizzazione e l'efficienza inibitoria della proteina.
• L'espressione della calpastatina viene rilevata in un'ampia gamma di tessuti, con una presenza caratterizzata nello sperma (come componente BS-17) e un'associazione alla malattia con la cheratoderma palmoplantare.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico che copre gli amminoacidi 510–610 della CAST umana; la reattività dell'anticorpo può essere influenzata dall'uso di isoforme o da modifiche post-traduzionali in questa regione.
• Per il Western blot, considerare l'ottimizzazione della concentrazione dell'anticorpo primario (es. 1:500–1:2000) e l'uso di appropriati controlli positivi come lisati di HeLa, HEK293 o muscolo scheletrico, dove la calpastatina è espressa endogenamente.
• L'anticorpo è reattivo incrociato con topo e ratto; verificare i pattern delle bande in queste specie, poiché i pesi molecolari possono differire leggermente a causa della variazione delle isoforme.
• Per l'ELISA, titolare l'anticorpo contro il peptide immunogeno o la proteina ricombinante a lunghezza intera per stabilire le concentrazioni di lavoro; utilizzare appropriati passaggi di blocco e lavaggio per ridurre il rumore di fondo.
• Poiché questo è un anticorpo policlonale, potrebbe rilevare multiple isoforme di calpastatina; confermare la specificità tramite esperimenti di knockdown con siRNA o sovraespressione in modelli cellulari pertinenti.

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