Cleaved PARP (Asp214) Anticorpo Policlonale di Coniglio - Q921K2

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Poli [ADP-ribosio] polimerasi

• Enzima chiave per la riparazione del DNA: PARP1 media la poli-ADP-ribosilazione (PARilazione) di proteine bersaglio in risposta al danno al DNA, reclutando il macchinario di riparazione alle rotture a singolo filamento.
• Marcatore di apoptosi: Durante l'apoptosi, la caspasi-3 e la caspasi-7 scindono la PARP1 a lunghezza intera (113 kDa) in Asp214, generando un frammento di 89 kDa che si lega irreversibilmente alle rotture del DNA e blocca la riparazione, promuovendo la morte cellulare programmata.
• Apoptosi mediata da AIFM1: Il frammento scisso subisce auto-PARilazione e agisce come vettore di poli-ADP-ribosio, innescando la traslocazione di AIFM1 dai mitocondri al nucleo per indurre frammentazione su larga scala del DNA.
• Distribuzione subcellulare: Si localizza principalmente nel nucleo (nucleoplasma e nucleolo) e si associa alla cromatina; dopo la scissione, il frammento si trasloca nel citosol.
• Domini funzionali: Contiene motivi a dita di zinco per il legame al DNA, un dominio di automodificazione e un dominio catalitico C-terminale che utilizza NAD+ come substrato.
• Famiglia genica: Appartiene alla superfamiglia delle PARP; Parp1 (Adprt1) è il membro fondatore. È anche nota come ADPRT, ARTD1 e PPOL.
• Modificazioni post-traduzionali: L'estesa auto-poli-ADP-ribosilazione modula la sua stessa attività e funge da impalcatura per altri fattori di riparazione. La scissione da parte delle caspasi è un evento regolatorio chiave.
• Parole chiave: ADP-ribosilazione, enzima allosterico, apoptosi, cromosoma, citoplasma, danno al DNA, riparazione del DNA, legame al DNA, glicosiltransferasi, immunità, immunità innata, legame isopeptidico, legame metallico, NAD, nucleotidiltransferasi, nucleo, identificazione proteomica, ripetizione, trascrizione, regolazione trascrizionale, transferasi, zinco, dita di zinco.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno comprende i residui 201-300 di PARP1 di topo, che includono il sito di scissione per caspasi-3/7 in Asp214. Questo design consente il riconoscimento specifico della forma scissa negli esperimenti di apoptosi.
• Per il Western blotting (WB), utilizzare lisati di cellule o tessuti di topo trattati con induttori di apoptosi (ad es., staurosporina, etoposide) per migliorare il segnale. La proteina a lunghezza intera migra a ~113 kDa, mentre il frammento scisso appare a ~89 kDa.
• Per ELISA, considerare l'uso dell'anticorpo come agente di cattura o di rilevamento nei saggi sandwich; l'abbinamento con un anticorpo pan-PARP consente di differenziare PARP scissa vs. totale.
• Convalidare la specificità dell'anticorpo utilizzando linee cellulari knockout per PARP1 o controlli con inibitori di caspasi per confermare che la banda rilevata scompaia in condizioni non apoptotiche.
• Evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento per mantenere l'integrità dell'anticorpo; la conservazione a breve termine a 4°C è accettabile, ma per la conservazione a lungo termine si raccomanda -20°C o inferiore.

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